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蛋白质分离和分析——免疫亲和层析

详细阐述利用亲和层析分离蛋白质的过程,进行蛋白质分析时,需将此规模缩小至微量离心管中进行免疫沉淀过程,对于单一的蛋白质或由相同亚基组成的蛋白质,经单向凝胶电泳后检测到单一的 蛋 白 质 条 带对荧光染色法进行了阐述,它主要用于磷蛋白和糖蛋白的检测。为了确定蛋白质是否是特异性抗原,可采用相对应的抗体进行免疫印迹分析实验步骤 基 本 方 案 可 溶 性 或 膜 结 合 抗 原 的 分 离材 料抗 体(Ab)-Sepharose (单兀 12. 2)活 化 的(对照)Sepharose填料,用于制 备 A b -Sepharose填 料(单 元 12. 2),但去除了抗体或偶联时用无关抗体替代细胞或匀浆的组织T S A 溶液,冰预冷裂解缓冲液,冰预冷5 % (m /V ) 脱 氧 胆 酸 钠(Na-D O C ,过滤除菌并室温保存)洗涤缓冲液VTris/Triton/NaCl 缓冲液, p H 8.0 和 p H 9.0,冰......阅读全文

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验             实验步骤

翻译后修饰蛋白质的定性和定量实验2

二、用 于 鉴 定 P T M 的富 集 技 术2.1 磷酸化丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸残基的可逆磷酸化也许是研究最为深人的 PT M 。蛋白质磷酸化信号网络介导细胞对与不同的应激因子、生长因子、细胞因子以及细胞间相互作用作出响应。憐酸化还影响多种细胞进程,如增殖、凋亡 、迁移 、转录和蛋白质翻译(W