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双重PCR毛细管电泳法快速检测大豆中转基因成分

【摘要】 目的建立抗草甘膦转基因大豆的快速检测方法。方法：针对转基因大豆基因组中被导入的35S启动子、NOS终止子和CP4-EPSPS抗草甘膦基因等外源基因，自行设计了两对引物，采用双重PCR同时扩增上述基因，用8g/L羟丙基甲基纤维素为筛分介质，在50cm×100μm i．d．涂壁毛细管中，于一10kV电压下用激光诱导荧光-毛细管电泳检测转基因大豆的PCR扩增产物。结果在优化的PCR反应和毛细管电泳条件下，本法可以同时检测出转基因大豆样品中三种外源基因，双重PCR扩增产物经测序证实与原基因序列完全一致，表明本研究设计的引物合理，扩增结果可靠。毛细管电泳进样量仅需5nl，分析时间为24min，迁移时间的相对标准偏差≤3.2。结论本方法较常规琼脂糖凝胶电泳特异性高，分析时间短，重现性好，检测灵敏，适合于大豆中转基因成分的快速检测。【关键词】双重PCR；激光诱导荧光-毛细管电泳；转基因大豆PCR产物检测；羟丙基甲基纤维素随着转基因农......阅读全文