RNA实验方案和应用（二）
miRNA 模拟物是化学合成的，双链RNA分子（通常长度为18–24个核苷酸），通过转染到细胞中，模拟成熟的内源性miRNA分子。miRNA抑制剂是单链（通常长度为21–25个核苷酸），经过修饰的RNA分子，通过转染到细胞中，特异性的抑制miRNA的功能。模拟物和抑制剂包含一些化学修饰，以便提高活性或者增强其在体内的稳定性。通过将miRNA模拟物转染到细胞中，并进行下游的基因表达分析或者表型分析，可以阐明特定miRNA分子的目标和发挥的作用。这些实验可以研究单个miRNA错误调节所造成的生物学影响，也能用于确定某个miRNA分子的特异性靶标基因。miRNA转染之后，如果降低或者提高基因的表达水平，说明研究的miRNA参与调节了这个基因的表达。类似的，miRNA在很多通路中的作用，都可以通过检测miRNA模拟物或者抑制剂转染之后的特定表型来研究。miRNA模拟物/抑制剂转染对于下游应用的影响，通常可以通过如下方案来分析：......阅读全文
RNA干涉实验
化学合成siRNA分子实验 体外转录合成siRNA分子实验 采用RNA聚合酶Ⅲ启动子表达siRNA分子 采用RNaseⅢ制备siRNA分子实验 实验方法
RNA干涉实验
RNA 干涉（RNA1） 是指在真核细胞中引入双链 RNA ( doubt-stranded RNA，dsRNA ) 分子从而导致具有序列同源性的基因产生特异件基内沉默（gene silencing ) 的现象。本实验来源「RNA 实验指导手册」主编：郑晓飞。实验方法原理当确定了靶基因上的 siRN
纯化RNA实验
从培养的细胞中纯化总RNA 从组织中纯化总RNA 实验材料 细胞
RNA干涉实验
实验方法原理 当确定了靶基因上的 siRNA 分子作用位点以后，根据靶位点的序列可以很方便地推导得到相应的 siRNA 分子的正义与反义 RNA 链序列。它们包含 19 bp 的互补双链区和两侧的不配对区（每侧为 2 个 U 成 2 个 T )，在合成时用 T 替代 U 可以降低成本并可以提
RNA分离与分析实验_分离RNA
实验材料标记细胞试剂、试剂盒乙酸缓冲液仪器、耗材漩涡器实验步骤1. 收获标记细胞。2. 小心处置上清液，用含 0.3% SDS 的 10 mmol/L 乙酸缓冲液悬浮细胞沉淀，每 1 ml 压积细胞用 10 ml 缓冲液。3. 于室温用漩涡器振荡裂解细胞。4. 加等体积的水饱和酚，充分混匀，于 60
细菌RNA制备实验
革兰氏阴性细菌中提取 革兰氏阳性细菌中提取 实验材料 RNA 试
RNA干扰主体实验
siRNA表达载体构建好后，即可进行RNA干扰主体实验。RNA干扰主体实验的重点在于：成功将siRNA表达载体导入目的细胞如果目的细胞的质粒转染效率较低（低于70%），则应采用腺病毒或慢病毒载体，利用病毒载体的高感染率、高表达特性，更好地开展RNA干扰主体实验。设置好分组和对照按照nature的标准
病毒RNA提取实验
实验方法原理 大多植物病毒RNA 为单链RNA ，并且其极性与mRNA 极性相同，植物病毒RNA 提取较为简单，一般使用酚氯仿即可获得满意结果。实验材料 TMV病毒液试剂、试剂盒 TE-饱和酚:氯仿氯仿NaAc乙醇TE缓冲液双菌水仪器、耗材 冷冻台式离心机低温真空干燥仪电泳仪电泳槽实验步骤 一、实验
真菌RNA提取实验
实验方法原理 液氮研磨可裂解细胞，促使核蛋白体的解离，使RNA与蛋白质分离，并将RNA释放到溶液中。当加入氯仿时，它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA进入水相，离心后可形成水相层和有机层，这样RNA与仍留在有机相中的蛋白质和DNA分离开。 实验材料 菌丝体试剂、试剂盒 NaCl蒸馏水SDSTr
细菌RNA制备实验
实验材料 RNA试剂、试剂盒 STET氯仿乙酸钠氯化铯无水乙醇EDTA仪器、耗材 离心机分光光度计摇床实验步骤 1. 培养100 ml 大肠杆菌或500 ml 蓝细菌至对数生长期，加入1/20体积终止缓冲液，置于冰上。2. 于4℃用JA-10转子17 700 g 离心5 min 收集细胞。3.