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PNAS:膜蛋白转运之谜

膜蛋白对于细胞正常功能至关重要,但人们并不清楚这些蛋白在细胞内合成后,是如何到达膜上的特定位点的。日前,科学家们鉴定了负责膜蛋白进出的分子机器,解答了这一重要的分子生物学谜题。他们希望这一突破性成果能够最终被用于抗菌药物的设计。 Bristol大学和欧洲分子生物学实验室EMBL的研究团队,利用新基因工程技术分离了关键的膜蛋白运输机器——holo-translocon。文章于二月十七日发表在美国国家科学院院刊PNAS杂志上。研究指出,这一发现可以应用到新兴的合成生物学领域,帮助人们开发拥有特殊功能的新型膜蛋白。 细胞膜与膜蛋白一直是当前生物学研究的热点之一。细胞膜(cell membrane)又称细胞质膜,是细胞表面的一层薄膜,有时也被称为细胞外膜或原生质膜。其主要结构成分一般是蛋白质占60%-80%,类脂占20%-40%,碳水化合物约占5%(分布在类脂和蛋白质之间)。 膜蛋白是指结合在细胞或细胞器膜上的......阅读全文

Western Blot详解

  Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。   本文主要通过以下几个方面来详细地介绍一下Western Blot技术:   一、原理   二、分类

Western Blot实验技术详解和常见问题解答

Western免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上,然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白,可用相应抗体作为一抗进行检测,对新基因的表达产物,可通过融合部分的抗体检测。一、原理与Southern或Northern杂交方法类似,但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被

探究分泌和摄取用于细胞间通讯的外泌体和其他胞外囊泡

  尽管在20世纪60年代后期首次描述了在哺乳动物组织或液体中,有囊泡在细胞周围存在,但是直到2011年才提出通用术语“胞外囊泡(extracellular vesicle, EV)”来定义所有的由脂质双层包围的胞外结构,如图1所示。在1980年代,人们描述了EV可以通过质膜向外出芽或通过细胞内内吞

流式细胞仪实验方法

一、 实验准备1.   标本制备:2.   zui小化非特异性结合: 二、凋亡1.凋亡的检测方法:网站和其它2.PI染色法3.Annexin V 法4.TUNNEL法 三、细胞因子1.激活的细胞因子2.CBA 四、血小板

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介

  ELISPOT 技术简介    随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中

细胞生物学名词解释(七)

27. 翻转扩散(transverse diffusion)又称为翻转(flip-flop)。它是指脂分子从脂双层的一个层面翻转至另一个层面的运动。磷脂发生翻转运动时,磷脂的亲水头部基团必须克服内部疏水区的阻力,这在热力学上是不利的。但是有些细胞含有翻转酶(flipase)能够促使某些磷脂从膜脂的一

基因突变致蛋白质合成异常分析(五)

   表4-2选择性免疫蛋白缺乏症分型IgA缺乏症选择性IgA缺乏症共济失调-毛细血管扩张症Nezelof综合症慢性皮肤粘膜念珠菌病SIgA(分泌型)缺乏症IgA缺乏症IgA缺乏症选择性IgM缺乏症Wiskott-Aldrich综合征IgE缺乏症IgA-IgM缺乏症IgA-IgG

Transwell侵袭实验

第一节 概念这里想明确两个概念,一个是Transwell,另一个是肿瘤细胞侵袭模型。1. Transwell关于Transwell这个词该如何解释,查了很多资料也未见准确的注解,我觉得可以这么理解吧,trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思,well有小室的意思,可以从字面上理解,这是一类有通透

一文了解细胞侵袭实验计数

  实验原理  将细胞小室(Transwell小室)放入培养板中,小室内称上室,培养板内称下室,上室内盛装上层培养液,下室内盛装下层培养液,上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内,由于聚碳酸酯膜有通透性,下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞,从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、

蛋白质组最新研究进展

  蛋白质组(Proteome)的概念最先由Marc Wilkins提出,指由一个基因组,或一个细胞、组织表达的所有蛋白质。 蛋白质组的概念与基因组的概念有许多差别,它随着组织、甚至环境状态的不同而改变。 在转录时,一个基因可以多种mRNA形式剪接,一个蛋白质组不是一个基因组的直接产物,蛋白质组中蛋

sapphire检测残留的宿主细胞蛋白HCP的方法

  许多生物制品例如抗体,重组蛋白,疫苗等的制备还是通过生物体系细胞工程合成,尽管采用多种纯化方式,在生物药物中还会有微量的宿主蛋白残留(HCP),会对药品的安全性及药性产生影响。   一、HCP的概念   HCP:Host cell protein,宿主细胞蛋白   疫苗、抗体、重组蛋白药物

膜片钳技术原理

可兴奋膜的电学模型      细胞膜由脂类双分子层和和蛋白质构成。脂质层的电导很低,由于双分子层的结构特点,形成了细胞的膜电容,通道蛋白的开闭状况主要决定了膜电导的数值。在细胞膜的电学模型中,膜电容和膜电导构成了一个并联回路。在细胞膜的电兴奋过程

sapphire检测残留的宿主细胞蛋白HCP的方法

许多生物制品例如抗体,重组蛋白,疫苗等的制备还是通过生物体系细胞工程合成,尽管采用多种纯化方式,在生物药物中还会有微量的宿主蛋白残留(HCP),会对药品的安全性及药性产生影响。一、HCP的概念HCP:Host cell protein,宿主细胞蛋白疫苗、抗体、重组蛋白药物等生物制品的生产主要利用某些

核酸和蛋白质序列分析-2

(2)输出:除了以文本形式外,还可以通过JalView显示和编辑结果。此外,还可以另外使用GeneDoc(常见于文献)及DNAStar软件等显示结果。多序列比对的结果还用于进一步绘制进化树。3、ORF(Open Reading Frame)分析从核酸序列翻译得到蛋白质序列,需要进行ORF分析,每个生

流式细胞仪实验方法-2

六、流式检测细胞染色基本过程(以全血为例)1、   收获细胞:肝素钠抗凝的静脉血,按1:1与培养基混匀,加刺激剂,同时加蛋白转运抑制剂(参照说明书), 混匀后,37℃,5%二氧化碳培养4-6小时2、   阻断Fc受体:用于消除非特异性的结合

一文了解外泌体在肺癌中的研究进展

  肺癌是全世界发病率和病死率最高的恶性肿瘤,其中非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌类型的85%以上,死亡率高达80%~90%。由于缺乏有效的早期诊断筛查方法,70%肺癌患者确诊时已是晚期,5年生存率仅为16%~18%。因此,寻找新的生物标志物和靶向治疗的新靶点对肺癌的早期诊断和临床治疗至关重要。

胃液和十二指肠液检查

胃是消化道最膨大的部分,上接食管,下连十二指肠。胃被分为贲门部、胃认错、胃体及幽门四部分。胃壁由粘膜、粘膜下层、肌层和浆膜组成。不同部位的胃粘膜结构有异分泌功能也不全相同。发解胃粘膜的结构,对掌握胃各种分泌功能的帮助。粘膜内的腺体有:①胃底腺:遍布于胃体和胃底,含有粘液颈细胞、胃酶细胞主细胞和壁细胞

干货|了解这些,养好细胞不是事儿!!!

  抗体药物是目前生物技术药物研究中最为活跃的领域,特别是在肿瘤和自身免疫性疾病等方面的临床应用,更是大放异彩。随着临床需求的增加,单克隆抗体药物发展迅速,FDA已批准的抗体药物多达70多个,抗体药物销售量年增长率基本在10%以上,大大高于制药行业平均水平,其市场规模已经达到千亿美元。  我国针对单

膜片钳与植物膜生物学研究

何龙飞1 、2  沈振国1 刘友良1  王爱勤2 (1 南京农业大学农学系,南京210095   2 广西大学农学院,南宁530004 )   膜片钳技术(patch2clamp technique ,PC) 是原西德马普所Erwin Neher 和Bert Sakmann 于1976 年发明的

ELISPOT酶联免疫斑点分析简介(一)

随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用 , 使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用用酶联免疫吸附法( ELISA )检测体液中游离的细胞因子( CK )或抗体,但由于游离的循环抗体或 CK 的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,而不能确切

Cell综述丨 十年之后的升级版——细胞自噬与疾病

  2016年日本科学家大隅良典(Yoshinori Ohsumi)独获诺贝尔生理或医学奖,获奖理由是在细胞自噬(autophagy)领域所做出的杰出贡献。自从细胞自噬(该概念并非大隅良典首创)这一概念被提出以后,至今已经有将近40000篇文章与其有关。  细胞自噬,是细胞内容物(Cargo)被运输

杆状病毒-昆虫细胞表达系统

实验步骤 一、杆状病毒表达载体 最简单的经典杆状病毒表达载体是一个重组的杆状病毒,其基因组含有一段外源核酸序列,通常为编码目标蛋白质的dDNA,在多角体蛋白启动子控制下进行转录。这个嵌合的基因由多角体蛋白启动子和外源蛋白编码序列组成

研究揭秘外泌体在支气管哮喘发病机制中的作用

  支气管哮喘(哮喘)是一种常见的慢性气道炎症性疾病,这种慢性炎症反应是由肺结构细胞(如上皮细胞、成纤维细胞及内皮细胞等)、炎症细胞(如嗜酸粒细胞、肥大细胞、嗜中性粒细胞及T-淋巴细胞等)和炎性介质等共同参与、相互作用的结果。外泌体是纳米大小由膜包绕的囊泡,其可通过旁分泌等途径在细胞间传递信息并调节

检测细胞凋亡的实验方法比较-4

六、Caspase-3活性的检测 Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用,其中caspase-3为关键的执行分子,它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞浆中,在凋亡的早期阶段,它被激活,活化的Caspase-3由两个

亚细胞(细胞器)构造的组成与功能

分离与纯化对象之一:“亚细胞(细胞器)”的构造与功能     上世纪20年代以Svedberg为首的欧洲科学家艰难研制的超速离心机原型主要目的是想分离和纯化病毒、细胞和亚细胞构造(细胞器),然而50年代中期开始生产的*代及以后的各代超速离心机,在很长

揭秘细菌如何利用“注射器”样结构引发机体感染

  近日来自麻省总医院的研究人员通过研究揭示了致病性细菌如何将毒性蛋白运输到宿主中进而引发感染,相关研究刊登于Nature Microbiology杂志上,文章中研究者描述了一项关键过程,即引发腹泻的志贺氏菌如何将特殊蛋白靶向“注射”到宿主细胞中,该研究发现同样也适用于对其它细菌的研究,比如沙门氏菌

WSSV病毒受体对虾类白斑综合症起决定作用造成感..(一)

WSSV病毒受体对虾类白斑综合症起决定作用造成感染的过程分析研究背景病毒感染过程是一个非常复杂的相互作用,包括多个步骤。它从病毒体附着到宿主细胞膜开始,然后与受体特异性结合。病毒受体的结合使病毒可以将其基因组直接在质膜上释放到细胞中,或者通过内吞作用进入细胞。内吞作用是高度复杂和动态的,并且涉及内吞

免疫学细胞因子的定量检测,Elispot酶联斑点分析技术 一

ELISPOT技术原理  在免疫学领域中,对于疾病以及疫苗研究不仅仅局限于体液免疫应答(B细胞免疫),细胞介导的免疫应答(cell mediated immune response,CMI)也是人们所关注的,而T细胞在CMI中起关键作用。在研究免疫应答机制时以

ELISPOT技术原理及实验方法介绍

  随着酶联免疫分析技术在医学及生物学领域的广泛应用,使体外检测各种细胞因子及抗体研究有了新的突破。在研究免疫应答机制时以往常用酶联免疫吸附法(ELISA)检测体液中游离的细胞因子(CK)或抗体,但由于游离的循环抗体或CK的半哀期不同,使之在体液中不断的被代谢或与靶器官结合,而不能确切的反映体内的抗