互补DNA的合成步骤
1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的鼠白血病病毒(MLV)反转录酶。AMV反转录酶包括2个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于RNA的DNA合成,依赖于DNA的DNA合成以及对DNA-RNA杂交体的RNA部分进行内切降解(RNA酶H活性)。MLV反转录酶只有单个多肽亚基,兼备依赖于RNA和依赖于DNA的DNA合成活性,但降解DNA—RNA杂交体中的RNA的能力较弱。且其热稳定性较AMV反转录酶差。MLV反转录酶能合成较长的eDNA(如大于2~3kb)。AMV反转录酶和MI。V反转录酶利用RNA模板合......阅读全文
互补DNA的合成步骤
1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒
互补DNA的合成步骤
1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒
互补DNA的合成方法
(1)取第一链反应液20uL,再依次加入:10X第二链缓冲液20uLDNA聚合酶123ul。RNaseH0.8ulH2O加至终体积为100/uL(2)轻轻混匀,如需进行第二链同位素掺入放射性活性测定,可取出10uL至另一eppendorf管,加入2~5uLCi[α一32P]dCTP。(3)14℃温浴
关于互补DNA的合成技术介绍
以Riboclone M-MLV CDNA合成技术为例。 Riboclone M—MLV cDNA合成系统采用M—MLV反转录酶的RNase H缺失突变株取代AMV反转录酶,使合成的cDNA更长。该系统的第一链合成使用M-MLV反转录酶,cDNA第二链合成采用置换合成法,采用RNaseH和DN
关于互补DNA的第一链的合成介绍
所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒反转录酶基因的大肠杆菌中分离到的
互补DNA第二链的合成方法介绍
(1)自身引导法。合成的单链eDNA3’端能够形成一短的发夹结构,这就为第二链的合成提供了现成的引物。当第一链合成反应产物的DNA—RNA杂交链变性后利用大肠杆菌DNA聚合酶I Klenow片段或反转录酶合成eDNA第二链,最后用对单链特异性的S1核酸酶消化该环,即可进一步克隆。但自身引导合成法
互补脱氧核糖核酸的合成步骤
1.cDNA第一链的合成所有合成cDNA第一条链的方法都要用依赖于RNA的DNA聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mRNA模板,另一个是反转录酶 [3] 。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤病毒纯化到的禽类成髓细胞病毒(AMV)逆转录酶和从表达克隆化的Moloney鼠白血病病毒
DNA合成仪的操作步骤
以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下: 1)仔细检查合成仪上所有试
互补-DNA的定义
中文名称互补 DNA英文名称complementary DNA;cDNA定 义利用反转录酶以mRNA为模板合成的DNA。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)
互补DNA的定义
cDNA是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。
互补DNA的概念
cDNA是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。
使用DNA合成仪的操作步骤
以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下: 1)仔细检查合成仪上所有试
制备互补DNA的方法
制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀
关于互补DNA的简介
cDNA是指具有与某RNA链呈互补碱基序列的DNA。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)作用而合成,并且在合成单链cDNA后,再用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DN
互补DNA的基本信息
cDNA 是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。
互补-DNA的基本信息
中文名称互补 DNA英文名称complementary DNA;cDNA定 义利用反转录酶以mRNA为模板合成的DNA。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)
关于互补DNA的基本介绍
cDNA 是指互补(有时称拷贝)DNA。特指在体外经过逆转录后与RNA互补的DNA链。与平常我们所称谓的基因组DNA不同,cDNA没有内含子而只有外显子的序列 。真核生物的mRNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。
单链互补DNA的定义
中文名称单链互补DNA英文名称single-strand cDNA;sscDNA定 义在逆转录酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
制备互补DNA的方法过程
制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分 。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可
双链互补DNA的定义
中文名称双链互补DNA英文名称double-strand cDNA;dscDNA定 义以双链互补DNA为模板合成的双链DNA。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学基础互补-DNA
中文名称:互补 DNA英文名称:complementary DNA;cDNA定 义:利用反转录酶以mRNA为模板合成的DNA。应用学科:细胞生物学(一级学科),细胞化学(二级学科)
DNA合成仪的使用方法操作步骤
DNA合成仪的使用方法操作步骤 以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤
DNA合成仪的使用方法操作步骤
以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:1)仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的
DNA合成仪的使用方法操作步骤
以亚磷酰胺寡核苷酸合成为例介绍该类仪器的一般操作步骤。亚磷酰胺DNA合成的试剂有:保护碱基的5/—DMT,A、G、C、T亚磷酰胺单体,四唑偶联催化剂,乙酐,N—甲基咪唑封闭试剂,三氯乙酸(TCA)脱保护溶液,12氧化混合物,乙腈清洗溶剂,氨水切除溶液。使用步骤如下:1)仔细检查合成仪上所有试剂瓶中的
制备互补DNA的方法和过程
制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原),则可从沉淀
关于互补DNA的制备方法介绍
制备互补DNA,往往需要先分离从目的基因转录来的mRNA.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质,则此基因的产物是总mRNA的主要组成部分 [2] 。就胰岛B细胞而论,此细胞含有高水平胰岛素前体mRNA,后者有时可以沉淀正在翻译的mRNA的核糖核蛋白体,如果用特异抗体结合所表达的蛋白质(抗原
什么是DNA互补性?
互补性是人际吸引的规则之一,具体指双方在交往时所产生的互相满足的心理状态。当交往双方的需要和满足途径正好成为互补关系时,双方会产生强烈的吸引力。如优柔寡断的人往往喜欢和果断的人在一起。除了互补性之外,相似性、熟悉与邻近、个人特征等都对人际吸引有影响作用。
细胞化学词汇单链互补DNA
中文名称:单链互补DNA英文名称:single-strand cDNA;sscDNA定 义:在逆转录酶催化下,以信使核糖核酸(mRNA)为模板合成与mRNA序列互补的单链DNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
细胞化学词汇双链互补DNA
中文名称:双链互补DNA英文名称:double-strand cDNA;dscDNA定 义:以双链互补DNA为模板合成的双链DNA。应用学科:生物化学与分子生物学(一级学科),核酸与基因(二级学科)
DNA分子杂交技术的原理碱基互补配对
怎么看出来是否杂交上,这个是要在探针上做标记(标记可以有很多种,生物的、荧光的、放射性的等等),杂交后是要洗脱的,只有这种特异性的杂交才被保留下来,再通过检测探针上的标记来看出是否杂交上。比如上面的“钥匙”,就像你用一串的“钥匙”去试,但你可以先在要的那个“钥匙”上做个标记,你不需要认识“钥匙”