Antpedia LOGO WIKI资讯

参与DNA修复的蛋白质可能有助于抑制癌症

每天,人体内的细胞都会经历无数次的分裂。新生的细胞用于替换分旧的,损坏的或死掉的细胞。不过,在细胞分裂之前, DNA会首先复制产生精确副本,并将其传递给新细胞。 为了开始复制过程,DNA双螺旋首先展开,因此每条链都可以用作合成新DNA的模板。科学家将展开的DNA链片段称为复制叉。随着这一高度复杂的复制过程的进行,原始DNA的两条链可能断裂或损坏数千次。 “实际上,复制过程中DNA序列会遭受相当大的“破坏”,这就是为什么需要有复杂的机制来确保复制过程受到保护。”(图片来源:Www.pixabay.com) 越来越多的证据表明,修复DNA断裂的途径称为同源重组(HR)。HR的关键因子是一种称为RAD51的蛋白质,该蛋白质与折断末端的单条DNA链结合,并通过将叉子转变成类似于鸡脚的结构来支撑复制叉。 在最近的一项研究中,作者构建了RAD51的突变体,以更好地了解其在复制叉中的关键功能。 文章作者Meson说:“我们制造了......阅读全文

结合DNA的蛋白质

结构蛋白可与DNA结合,是非专一性DNA-蛋白质交互作用的常见例子。染色体中的结构蛋白与DNA组合成复合物,使DNA组织成紧密结实的染色质构造。对真核生物来说,染色质是由脱DNA与一种称为组织蛋白的小型碱性蛋白质所组合而成;而原核生物体内的此种结构,则掺杂了多种类型的蛋白质。DNA可在组织蛋白的表面

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质-4

注意事项:1. DNA在中间层和有机相中时可在2~8℃保存过夜。2.DNA沉淀在75%乙醇中2~8℃可保存几个月。3.DNA在8mM NaOH溶液中4℃可放置过夜,如长期保存需用HEPES调节pH至7~8并且加EDTA至1mM,可置于4℃或-20℃长期保存。常见问题分析:得率低:A.样品匀浆和裂解的

蛋白质如何阻止细胞攻击自己的DNA

病毒通过将其DNA注入宿主细胞来繁殖。一旦进入细胞内液,这种异物就会触发一种称为cGAS-STING途径的防御机制。蛋白质环状GMP-AMP合酶(cGAS)也存在于液体中,它与入侵的DNA结合形成一个新分子。反过来,它与另一种称为干扰素基因刺激物(STING)的蛋白质结合,从而诱导炎症性免疫反应。 

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质-3

DNA污染:A. 样品匀浆时加的试剂量太少。B.样品中含有有机溶剂(如乙醇,DMSO等),强缓冲液或碱性溶液。蛋白聚糖和多糖污染:沉淀RNA的过程中作以下改进可去除这些污染,步骤7中,每使用1ml TRIzol在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液(0.8M柠檬酸钠和1.2MNaCl)混

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质(一)

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用,与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比,最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化,细胞裂解,溶解细胞内含物,同时因含有RNase抑制剂可保持RNA

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质(二)

DNA的分离准备试剂:乙醇0.1M柠檬酸钠(含10%乙醇)、 75%乙醇、8mM NaOH操作步骤:1. 样品加氯仿分层后,移去上层水相,用乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA。每使用1mlTRIzol加0.3ml无水乙醇混匀,室温放置3分钟,2~8℃不超过2000×g离心5分钟。2. 移去上清,(如需

TRIzol法同时提取RNA、DNA、蛋白质-2

5. 2-8℃10000×g离心15分钟。样品分为三层:底层为黄色有机相,上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中,水相体积约为所用TRIzol试剂的60℅。6. 把水相转移到新管中,如要分离DNA和蛋白质可保留有机相,进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1mlTRIzol加入0

DNA 酶 I 足迹法对 DNA 上的蛋白质结合位点作图实验

本方案介绍在放射性标记的 DNA 片段上确定蛋白质结合位点的作图方法。本方案使用 DNA 酶 I 切割 DNA, 而在替代方案中是用羟自由基断裂 DNA。如果希望得到优化足迹法反应的建议,请参见本方案最后部分的疑难解析以及优化 DNA 酶 I 足迹法反应的栏目。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)