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实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白（- 70℃ 小量储存）有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反应缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 对 1.5 ml 微量离心管做双管标记，每个反应按以下比例加入各反应组分：5 μl 5×CaM 激酶反应缓冲液5 μl 10 mmol/L 合成肽底物溶液5 [γ-32P] ATP 溶液（ATP 终浓度为 5 mmol/L， 放射活性为 5 μCi/μl）5 μl 1 mg/ml 钙调蛋白或 5 μl 水0～30 μl 水盖好离心管，混匀，放入 30℃ 水浴温育 10 min。2. 每 30 s 一管依次加入 1～25 μl 酶样品开始反应。加入酶量的容积取决于样品中酶活性的大小。在预试验中所得的最大反应值可衡量磷酸转移反应的程度。在反应中为了保持磷酸基与底物的线性结合关系可适当减小酶的......阅读全文
基本方案 实验方法原理 实验材料
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物，当酶样品中含有磷酸转移酶活性时，蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料1 mg ml 钙调蛋白（- 70℃ 小量储存）有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反