聚丙烯酰胺凝胶电泳,普遍用于分离蛋白质及较小分子的核酸。琼脂糖凝胶孔径较大适用于分离同工酶及其亚型,大分子核酸等应用较广。琼脂糖和聚丙烯酰胺可以制成各种形状、大小和孔隙度。琼脂糖凝胶分离DNA度大小范围较广,不同浓度琼脂糖凝胶可分离长度从200bp至近50kb的DNA段。琼脂糖通常用水平装置在强度和方向恒定的电场下电泳。聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5-500bp)效果较好,其分辩力极高,甚至相差1bp的DNA段就能分开。聚丙烯酰胺凝胶电泳很快,可容纳相对大量的DNA,但制备和操作比琼脂糖凝胶困难。聚丙烯酰胺凝胶采用垂直装置进行电泳。目前,一般实验室多用琼脂糖水平平板凝胶电泳装置进行DNA电泳。琼脂糖凝胶电泳原理:琼脂糖是从琼脂中提纯出来的,主要是由D-半乳糖和3,6脱水L-半乳糖连接而成的一种线性多糖。琼脂糖凝胶的制作是将干的琼脂糖悬浮于缓冲液中,通常使用的浓度是1%-3%,加热煮沸至溶液变为澄清,注入模板后室温下冷却凝聚即成琼......阅读全文
分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清
分散介质中的带电粒子在直流电场的作用下,向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳(electrophoresis)。蛋白质为两性电解质,在不同pH溶液中带不同的电荷,从而在直流电场中能够泳动,这就是蛋白质的电泳现象。1937年瑞典化学家Tiselius首先建立了蛋白质的界面电泳技术,并成功地将血清蛋
实验方法原理常规聚丙烯酰胺凝胶电泳后的检测,对于不同的目的,应采用不同的检测方法。由于这种电泳方法不破坏蛋白质的生物活性,所以可选用的检测方法很多。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液Tris-甘氨酸缓冲液贮液电极缓冲液样品缓冲液过硫醆铵浓缩胶缓冲液贮液分离胶缓冲液贮液实验步骤一、早期染色方法用染料和生物大
【概述】带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子在电场中移动速度不同而达到分离的技术称为电泳技术。 1807年,由俄国莫斯科大学的斐迪南·弗雷德里克·罗伊斯(Ferdinand Frederic Reuss)最早发现。
说到Western Blotting,估计所有技术员都会联想到蓝底上的黑色条带,或者是仪器扫描的白底黑条图片。经过了漫长的实验流程,得到的会是清晰的、符合实验理论的完美结果,或者更多的是其他让自己略感失望的结局。比起其他分子生物学实验,Western Blotting实验似乎更加冗长、更加考验技术,
实验原理 琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA
实验原理 琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分
PCR扩增反应完成之后,必须通过严格的鉴定,才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法,能判断产物的大小,有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,前者主要用于DNA片段大于100bp者,后者主要用来检测小片段DNA。1.
电泳技术是一门古老而又年轻的技术。早在1809年俄国物理学家Reuss就进行了世界上第一次电泳实验,此后各种电泳技术及仪器相继问世,广泛应用于蛋白质、氨基酸、核酸、其他有机化合物甚至无机离子等领域的分离和/或鉴定。近年来,先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统被越来越多的临床实验室所采用检验|地带网搜
实验原理琼脂糖凝胶电泳常用于分离、鉴定 DNA、RNA 分子混合物,以琼脂凝胶作为支持物,利用 DNA 分子在电场中时的电荷效应和分子筛效应,达到分离混合物的目的。DNA 分子在高于其等电点的溶液中带负电,在电场中由阴极向阳极运动。在一定的电场强度下,忽略DNA分子携带的电荷,DNA 分
PCR扩增反应完成之后,必须通过严格的鉴定,才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和zui简便的方法,能判断产物的大小,有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,前者主要用于DNA pian段大于100bp者,后者主要用
电泳仪的这些常识你知道吗?*节 电泳原理第二节 常用电泳方法第三节 常用电泳仪的基本结构及技术指标 第四节 常用电泳仪简介第五节 毛细管电泳第六节 电泳仪的
聚丙烯酰胺凝胶电泳仪(PAGE)是以聚丙烯酰胺凝胶作为载体的电泳技术,于1959年建立,1964年进一步从理论和实验技术上得到改进并推广应用。由于分辨率高,目前已广泛用于蛋白质等生物大分子的分析。一、PAGE工作原理:
来自宾夕法尼亚州费城杰佛逊医学院(Jefferson Medical College)外科系,以及Kimmel肿瘤中心(Kimmel Cancer Center)的研究人员申请到了一项新专利,这项专利也许未来某天会成为DNA分析过程中的关键技术,而且这一发现也可以应用于多个领域,比如法医鉴定,克隆或
实验方法原理 琼脂糖凝胶电泳是用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。 琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大分子物质在涌动时受到的阻力大,因此在凝胶电泳中,带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量,
实验原理一. DNA的限制性内切酶酶切分析限制性内切酶能特异地结合于一段被称为限制性酶识别序列的DNA序列之内或其附近的特异位点上,并切割双链DNA。它可分为三类:Ⅰ类和Ⅲ类酶在同一蛋白质分子中兼有切割和修饰(甲基化)作用且依赖于ATP的存在。Ⅰ类酶结合于识别位点并随机的切割识别位点不远处的DNA,
实验方法原理 利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同,在一个稳定的、连续的、线性 pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析。所以利用等电聚焦技术分析的对象只限于蛋白质和两性分子。分析的条件是凝胶中有稳定的、连续的和线性的 pH 梯度。试剂、试剂盒 丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液仪器、
电泳技术是一门古老而又年轻的技术。早在1809年俄国物理学家Reuss就进行了世界上第一次电泳实验,此后各种电泳技术及仪器相继问世,广泛应用于蛋白质、氨基酸、核酸、其他有机化合物甚至无机离子等领域的分离和/或鉴定。近年来,先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统被越来越多的临床
实验方法原理 从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及
一. 实验目的1. 掌握DNA指纹图谱技术的概念、原理和基本操作过程2. 学习DNA的限制性酶切的基本技术3. 掌握琼脂糖凝胶电泳的基本操作技术,学习利用琼脂糖凝胶电泳测定DNA片段的长度,并能对实验结果进行分析。二. 实验原理1984年英国莱斯特大学的遗传学家Jefferys及其合作者首次将分离的
电泳技术是一门古老而又年轻的技术。早在1809年俄国物理学家Reuss就进行了世界上第一次电泳实验,此后各种电泳技术及仪器相继问世,广泛应用于蛋白质、氨基酸、核酸、其他有机化合物甚至无机离子等领域的分离和/或鉴定。近年来,先进的电泳技术和各种自动电泳分析系统被
【目的和要求】1. 掌握聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本原理2. 掌握垂直板状凝胶电泳槽的使用和凝胶的配制方法。3. 学会利用相对迁移率分析蛋白质种类。【实验原理】带电颗粒在电场的作用下,向着与其相反的电极移动,称为电泳。电泳做为一种物质分离及鉴定技术,其原理在于任一物质质点,由于其本身的解离作用或由于表面
实验方法原理 从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及对细胞转染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需时间长,但是工作量小。回收率少于30%~90%,视 DNA 片段大小
实验方法原理利用蛋白质分子或其他两性分子的等电点的不同,在一个稳定的、连续的、线性 pH 梯度中进行蛋白质的分离和分析。所以利用等电聚焦技术分析的对象只限于蛋白质和两性分子。分析的条件是凝胶中有稳定的、连续的和线性的 pH 梯度。试剂、试剂盒丙烯酰胺单体贮液过硫酸铵贮液仪器、耗材注射器水浴实验步骤一
利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化 实验材料 T4 DNA 连接
对于复杂混合物,如全细胞裂解物或富集的亚细胞组分,通过两步正交的分离 (orthogonalseperation),二维凝胶 (2D 胶)电泳可以很好地分离成几百个至上千个单个蛋白质。第一次分离基于电荷,即使用变性等电聚焦电泳; 第二次分离基于表观分子质量,即使用变性十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电
实验方法原理 用琼脂糖作支持介质的一种电泳方法。其分析原理与其他支持物电泳的最主要区别是:它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构,物质分子通过时会受到阻力,大
从聚丙烯酰胺凝胶中回收 DNA 的标准方法是由 Maxam 和 Gilbert (1977) 最先介绍的“压碎与浸泡”技术。洗脱下来的 DNA 通常不含有酶抑制物及对细胞转染或微量注射有毒害的污染物。此方法所需时间长,但是工作量小。回收率少于30%~90%,视 DNA 片段大小而定。本实验来源「分子
不同来源的核糖体RNA大小来源rRNA大小(kb)E. coli16S 23S1.5 2.9S. cerevisiae18S 26S2.0 3.8小鼠18S 28S1.9 4.7人18S 28S1.9 
这种技术(McDonell et al. 1977 ) 可以从琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶切片回收分子质量范围较宽的双链 DNA,并且产量较高。这种方法多少有些麻烦,必须将凝胶切片单独放入透析袋,因此不能用于回收多种 DNA 样品。但是电洗脱效果很好可以避免其他方法所遇到的问题。本实验来源「分子克隆实