PCR技术拓展知识
1.逆转录PCR（RT-PCR）用来扩增RNA的方法。2.竞争逆转录PCR（competitive reverse transcription-polymerase chain rection C-RT-PCR）低丰度RNA定量的好方法。3.多重PCR（multiples PCR）在同一PCR体系中加入多对引物可用于基天长度很长，发生多处缺失的检测。扩增同一模板的几个区域。4.多种PCR可同时加入多套以生物素标记的引物起进手PCR反应。5.反向PCR（iverse polymerase chain reaction）对一个已知的DNA段两侧的未知序列进行扩增和研究。6.不对称PCR在扩增循环中引入不同引物浓度，以得到单链DNA并进行列测定，以了解目的基因的序列。7.锚定PCR（anchored polymerase chain reaction）帮助克服序列未知或序列未全知带来的障碍。在未知序列未端添加同聚物尾序，将互补的引物连......阅读全文
PCR简介/PCR仪
PCR的要素基本的PCR须具备PCR仪图册1.要被复制的DNA模板 Template2.界定复制范围两端的引物Primers.3.DNA聚合酶Taq. Polymearse4.合成的原料（四种脱氧核苷酸）及水。 PCR仪工作原理利用升温使DNA变性，在聚合酶的作用下使单链复制成双链，进而达到基因复制
Troubleshooting for PCR and multiplex PCR
Troubleshooting discussion is based on the PCR protocol as described in the table below. All reactions are run for 30 cycles.COMPONENTVOLUMEFINALCONCE
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
多重PCR（Multiplex PCR）
一般PCR仅应用一对引物，通过PCR扩增产生一个核酸片段，主要用于单一致病因子等的鉴定.多重PCR(multiplex PCR)，又称多重引物PCR或复合PCR，它是在同一PCR反应体系里加上二对以上引物，同时扩增出多个核酸片段的PCR反应，其反应原理，反应试剂和操作过程与一般PCR相同. 多
重叠PCR—overlap PCR
1、简介 重叠PCR也是基本的PCR原理：变性-退火-延伸。不同的是在重叠PCR过程是两个或者几个片段重叠延伸之后，再进行指数扩增的PCR过程。 2、基本原理*步：PCR产生两个或者几个片段，这几个片段之间必须有重叠区。 第二步：以两个片段为例，见上图，*步产生的两个片段，A D链之间有互补，B
普通PCR梯度PCR 原位PCR 荧光定量PCR仪的区别
普通PCR仪： 一般把一次PCR扩增只能运行一个特定退火温度的PCR仪，称之为普通PCR仪，也就是传统的PCR仪。如果要用它做不同的退火温度则需要多次运行。如；（ABI 2720） 梯度PCR仪： 一次性PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（通常12种温度梯度）的称
反转录PCR（RT-PCR, Reversed Transcript PCR）
1 原理 RT—PCR是一种将cDNA合成与PCR技术结合分析基因表达的快速灵敏的方法，主要用于对表达信息进行检测或定量分析,还可以用来检测基因表达差异而不必构建cDNA文库克隆cDNA。RT-PCR的模板可以为总RNA或poly(A)+选择性RNA。逆转录反应可以使用逆转录酶，以随机引物、ol
直接原位PCR（In situ PCR）
原位PCR是原位杂交细胞定位和PCR的高灵敏度相结合的技术，使得靶基因检测有了极大的改进。此技术是在细胞（爬片、甩片或涂片）或组织（石蜡、冰冻切片）上直接对靶基因片段进行扩增，通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。一、组织切片和细胞样品的制备试剂与配置10%福尔马林；二甲苯；PBS操
反向PCR （inverse-PCR）
利用反向PCR可对未知序列扩增后进行分析，探索邻接已知DNA片段的序列，并可将仅知部分序列的全长cDNA进行分子克隆，建立全长的DNA探针。可用于：（1）基因游走研究；（2）转位因子研究；（3）已知序列DNA旁侧病毒整合位点分析等研究。实验方法原理反向PCR可用于研究与已知DNA区段相连接的未知染色
菌落PCR（Colony PCR）方法
菌落PCR（Colony PCR）可不必提取基因组DNA，不必酶切鉴定，而是直接以菌体热解后暴露的DNA为模板进行PCR扩增，省时少力。建议使用载体上的通用引物。通常利用此方法进行重组体的筛选或者DNA测序分析。最后的PCR产物大小是载体通用引物之间的插入片断大小。具体方法：1、PCR混合物的制备T