酶联免疫吸附实验（ELISA）全套解决方案
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。②使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，......阅读全文
酶联免疫吸附实验（ELISA）－全套解决方案
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗
酶联免疫吸附实验（ELISA）
实验材料待检的人血清试剂、试剂盒包被液洗涤液磷酸盐-柠檬酸缓冲液底物溶液终止液酶结合物冻存液的母液应用液仪器、耗材聚苯乙烯微量反应板酶标检定仪吸管橡皮吸头等检测结核菌抗体的 ELISA 试剂盒实验步骤实验所需「试剂」具体见「其他」1. 包被抗原用套有橡皮吸头的 0.2 ml 吸管小心吸取用包被液稀释
酶联免疫吸附（ELISA）实验
实验方法原理 图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗原存在，即可与包被于固相载体上的特异性抗体结合，经保温孵育洗涤后，即可加入酶标记特异性抗体，再经孵育洗涤后，加底物显色进行测定，底物降解的量即为欲测抗原的量。
酶联免疫吸附（ELISA）实验
双抗体夹心法（测抗原） 间接法（测抗体） 竞争法测抗原 实验方法原理 图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤
酶联免疫吸附实验（ELISA）
实验方法原理 实验材料 待检的人血清试剂、试剂盒 包被液洗涤液磷酸盐-柠檬酸缓冲液底物溶液终止液 酶结合物冻存液的母液应用液仪器、耗材 聚苯乙烯微量反应板酶标检定仪吸管橡皮吸头等检测结核菌抗体的 ELISA 试剂盒实验步骤 实验所需「试剂」具体见「其他」1. 包被抗原用套有橡皮吸头的 0.2 ml
酶联免疫吸附实验（ELISA）
一、实验目的：酶联免疫吸附试验是免疫酶技术的一种，免疫酶技术属于三大标记技术之一，掌握该试验的原理和主要技术，了解三大标记技术的异同及各自的主要应用。 二、实验原理：酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原（或抗体）的方法。酶与抗体（或抗原）交联后，
酶联免疫吸附（ELISA）实验
酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。（2）研究抗酶抗体的合成。（3）显现微量的免疫沉淀反应。（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。1 实验方法原理 双抗体夹心法（常用于测定抗原） 用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相
酶联免疫吸附实验（ELISA）
一、实验目的： 酶联免疫吸附试验是免疫酶技术的一种，免疫酶技术属于三大标 记技术之一，掌握该试验的原理和主要技术，了解三大标记技术的异同及各自的主要应用。 二、实验原理： 酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原（或抗体）的方
酶联免疫吸附（ELISA）实验
实验方法原理图1：竞争法测抗原示意图本法首先将特异性抗体吸附于固相载体表面，我们把抗原和抗体吸附到固相载体表面的这个过程，称为包被（Coated），也可叫做致敏。经洗涤后分成两组：一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液，而另一组只加酶标记抗原，再经孵育洗涤后加底物显色，这两组底物降解量之差，即为我们所要
酶联免疫吸附实验（ELISA）
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：
酶联免疫吸附实验（ELISA）
一、实验目的： 酶联免疫吸附试验是免疫酶技术的一种，免疫酶技术属于三大标 记技术之一，掌握该试验的原理和主要技术，了解三大标记技术的异同及各自的主要应用。 二、实验原理： 酶联免疫吸附试验（ELISA）是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原（或抗体）的方
酶联免疫吸附（ELISA）实验
酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。（2）研究抗酶抗体的合成。（3）显现微量的免疫沉淀反应。（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。实验方法双抗体夹心法（测抗原）间接法（测抗体）竞争法测抗原实验方法原理图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相
酶联免疫吸附实验（ELISA）基本原理
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原或抗
酶联免疫吸附（ELISA）实验——间接法（测抗体）
实验方法原理图1：间接法测抗体示意图间接法首先用抗原包被于固相载体，这些包被的抗原必须是可溶性的，或者至少是极微小的颗粒，经洗涤，加入含有被测抗体之标本，再经孵育洗涤后，加入酶标记抗抗体，(对人的标本来说即加酶标抗人球蛋白IgG、IgM)，再经孵育洗涤后，加底物显色，底物降解的量，即为欲测抗体的量，
酶联免疫吸附试验（ELISA）
酶联免疫吸附试验 (以下简称ELISA) ：是酶免疫测定技术中应用最广的技术。其基本方法是将已知的抗原或抗体吸附在固相载体 ( 聚苯乙烯微量反应板 ) 表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行，用洗涤法将液相中的游离成分洗除。常用的 ELISA 法有双抗体夹心法和间接法，前者用于检测大分子抗原，后
酶联免疫吸附试验—抗体检测实验－(ELISA－试验)
实验方法原理 该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原，能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特 异性抗体（图1.1. 1)。Img纯化抗原可用于80〜800个微量滴定板的筛选。实验步骤 一、实验材料：显色剂：碱性磷酸酶标记的蛋白A (Sigma公司），碱性磷酸酶标记的蛋白G (Calbiochem公司），碱
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)
抗体夹心 ELISA 法检测可溶性抗原实验方法原理该检测方法比抗原直接结合到固相上的 ELISA 方法敏感性高 2〜5 倍（图 1. 1. 3)。实验步骤一、附加材料（其他材料见基本方案）特异性抗体（单克隆或多克隆）或者来自抗血清、腹水或杂交瘤上清液（单元1.4) 中的免疫球蛋白（单元 1.5，单元
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试
间接ELISA法检测特异性抗体实验 备选方案1: 直接竞争ELISA法检测可溶性抗原实验 备选方案 2: 抗体夹心 ELISA 法检测可溶性抗原 备选方案3：双抗体夹心ELISA法检测特异性抗体 备选方案4：夹心ELISA法检测同种型实验
酶联免疫吸附测定实验（ELISA）的操作流程
Elisa 操作流程（以人IL-4 ELISA KIT为例）： 检测原理: 本实验采用双抗体夹心ELISA法。抗人IL-4单抗包被于酶标板上，标本和标准品中的IL-4会 与单抗结合，游离的成分被洗去。加入生物素化的抗人IL-4抗体和辣根过氧化物酶标记的亲 和素。生物素与亲和素特异性结合；抗人
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)3
双抗体夹心ELISA法检测特异性抗体实验方法原理在有少量酶标特异抗体但无法获得纯化抗原时，用该检测方法筛选特异性抗体最为有效（图1.1.4）。另外，这种方法也可利用那些结合同一抗原的不同单克隆抗体来绘制抗原表位图。实验步骤一、附加材料（其他材料见基本方案）包被抗体溶液（特异性针对待测种属免疫球蛋白的
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)6
实验方法原理在测定单一细胞群体的抗原表达水平时，该检测过程（图1.1.5）与流式细胞分析 一样灵敏（单元4.1、单元4. 2）。但在检测混合细胞时，敏感性不及流式细胞分析。用生物素化的抗体替代酶标抗体，就可转化为间接方法，而后加入亲和素标记的碱性磷酸 酶再次孵育可增加敏感性。实验步骤一、附加材料（其
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)1
间接ELISA法检测特异性抗体实验实验方法原理该检测方法使用毫克级的纯化或半纯化抗原，能筛选抗血清和杂交瘤上清液中的特 异性抗体（图1.1. 1)。Img纯化抗原可用于80〜800个微量滴定板的筛选。实验步骤一、实验材料：显色剂：碱性磷酸酶标记的蛋白A (Sigma公司），碱性磷酸酶标记的蛋白G (
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)2
直接竞争ELISA法检测可溶性抗原实验实验方法原理该检测方法是使用特异性抗体和毫克级纯化或半纯化抗原来定性或定量测定可溶性 抗原的最有效的方法（图1.1. 2)。用抗体替换特异性的酶标抗体，就可转为间接方法， 以种属特异性或同种型特异性酶结合物作为第三种试剂即可检测结合的特异性抗体 的量。试剂、试剂
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)7
实验方法原理本检测方法可用来筛选细胞表面抗原的特异性抗体（图 1.1.6）。注意：所有步骤必须在 4°C、含有 NaN3 的生理缓冲液中进行。实验步骤一、附加材料（其他材料见基本方案）未混合的细胞样品碱性磷酸酶标记抗体或 F（ab’）（从免疫动物中获得的抗免疫球蛋白抗体）阳性对照抗体（即与实验细胞反
酶联免疫吸附（ELISA）测定伤寒杆菌“O”抗体实验
测定伤寒杆菌“O”抗体酶联免疫吸附试验是用酶标记的抗体（或SPA）检测未知抗原或抗体的方法。此法敏感性高，特异性强。常用的是ELISA方法，间接法，双抗体法和抗原法。实验材料伤寒杆菌试剂、试剂盒邻苯二胺碳酸钠碳酸氢钠PBS磷酸氢二钠柠檬酸仪器、耗材聚乙烯塑料反应板离心机摇床培养箱实验步骤1. 抗原
酶联免疫吸附试验——抗体检测实验－(ELISA－试验)5
实验步骤一、附加材料（其他材料见基本方案）抗同种型包被抗体：重链特异抗体（抗 μ、α、γ、б、ε）、重链亚类特异抗体（抗 γ1、γ2a、γ2b、γ3、γ4）或轻链同种型特异抗体（抗 γ和 κ）（不可结合显色 剂中的抗体）标准同种型抗体（如已知同种型纯化抗体）显色剂：碱性磷酸酶标记抗全部免疫球蛋白重链
酶联免疫吸附（ELISA）测定伤寒杆菌“O”抗体实验
实验材料 伤寒杆菌试剂、试剂盒 邻苯二胺碳酸钠碳酸氢钠PBS磷酸氢二钠柠檬酸仪器、耗材 聚乙烯塑料反应板离心机摇床培养箱实验步骤 1. 抗原包被取洁净的聚苯乙烯微量反应板，于每孔内加伤寒抗原0.1毫升（用包被缓冲液稀释，蛋白含量10微克/毫升），置37℃1小时，弃抗原液，用洗涤液3次每次3分钟。2
酶联免疫吸附（ELISA）实验——双抗体夹心法（测抗原）
酶联免疫吸附（ELISA）可以：（1）免疫酶染色各种细胞内成份的定位。（2）研究抗酶抗体的合成。（3）显现微量的免疫沉淀反应。（4）定量检测体液中抗原或抗体成份。实验方法原理图1. 双抗体夹心法测抗原示意图 本法首先也是用特异性抗体包被于固相载体，经洗涤后加入含有抗原之待测样品，如待检样品中有相应抗
ELISA实验常见问题及解决方案
指南。以下是影响ELISA检测的关键因素，也是众多ELISA 用户在实验中经常遇到的问题及解决方案，希望能对您的ELISA检测有帮助：为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？ 温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包
酶联免疫吸附测定（ELISA）
基本原理 1971年Engvall和Perlmann发表了酶联免疫吸附剂测定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）用于IgG定量测定的文章，使得1966年开始用于抗原定位的酶标抗体技术发展成液体标本中微量物质的测定方法。这一方法的基本原理是：①使抗原