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PCRDGGE实验原理和操作步骤

【实验目的】 1.了解PCR-DGGE技术的原理。 2.了解并熟悉PCR-DGGE技术的步骤。 【实验原理】 变性梯度凝胶电泳(DGGE)是一种根据DNA片段的熔解性质而使之分离的凝胶系统。核酸的双螺旋结构在一定条件下可以解链,称之为变性。核酸50%发生变性时的温度称为熔解温度(Tm)。Tm值主要取决于DNA分子中GC含量的多少。DGGE将凝胶设置在双重变性条件下:温度 50~60 ℃,变性剂0~100%。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm 值,此区便开始熔解,而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变,达到分离的效果。Tm的改变依赖于DNA序列,即使一个碱基的替代就可引起Tm值的升高和降低。因此,DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码突变以及少于10个碱基的缺失突变。 为了提高 ......阅读全文

C.B.S变性梯度凝胶电泳DGGE 应用原理及注意事项

  原理:变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophresis,DGGE)是一种实用价值较高研究DNA突变的分析方法。本质是一类电泳(电泳定义:带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子

C.B.S变性梯度凝胶电泳DGGE 应用原理及注意事项

  原理:变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophresis,DGGE)是一种实用价值较高研究DNA突变的分析方法。本质是一类电泳(电泳定义:带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用带电粒子

C.B.S变性梯度凝胶电泳DGGE 应用原理及注意事项

原理:变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophresis,DGGE)是一种实用价值较高研究DNA突变的分析方法。本质是一类电泳(电泳定义:带电颗粒在电场作用下,向着与其电性相反的电极移动,称为电泳(electrophoresis, EP)。利用