基因克隆的载体类型
①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制，且对受体细胞无害，不影响受体细胞正常的生命活动。②有多个限制酶（Restriction enzymes）切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入。③含有复制起始位点，能够独立复制；通过复制进行基因扩增，否则可能会使重组DNA丢失。④有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。一般来说，天然运载体往往不能满足上述要求，因此需要根据不同的目的和需要，对运载体进行人工改建。当前所使用的质粒载体几乎都是经过改建的。⑤载体DNA分子大小应合适，以便操作。基因克隆的载体类型：质粒载体，噬菌体载体，柯斯质粒载体，M13噬菌体载体，噬菌粒载体。......阅读全文
克隆载体的准备实验
许多载体及其衍生物被开发出来用于克隆 PCR 产物，其中包括典型的 pBluescript 类载体。它们具有多克隆位点和简化的多克隆位点，PCR-Script Direct 质粒也是这样。简化的多克隆位点允许使用者把常用的限制酶位点整合到 PCR 引物中，同时还避免了相同的目标序列同时出现在质粒载
克隆载体的准备实验
试剂、试剂盒 氯仿-异戊醇酚：氯仿-异戊醇（25:24:1)氯化锂 (LiCl10mol L)酚（Tris-饱和）TE 缓冲液乙醇碱性磷酸酶平末端限制性内切酶和反应缓冲液克隆载体仪器、耗材 水浴锅真空干燥机 琼脂糖凝胶电泳设备和试剂实验步骤 一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂氯仿-异戊醇（24:1)酚
克隆载体的准备实验
试剂、试剂盒 氯仿-异戊醇 酚：氯仿-异戊醇（25:24:1) 氯化锂 (LiCl 10mol L) 酚（Tris-饱和） TE 缓冲液
分子克隆的常用载体
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
分子克隆常用载体
分子克隆常用载体 DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用
PCR产物的T载体克隆
（一）重组T质粒的构建一．原理外源DNA与载体分子的连接就是DNA重组，这样重新组合的DNA叫做重组体或重组子。重组的 DNA分子是在DNA连接酶的作用下，有Mg2+、ATP存在的连接缓冲系统中，将分别经酶切的载体分子与外源DNA分子进行连接。DNA连接酶有两种：T4噬菌体DNA连接酶和大肠杆菌
分子克隆的常用载体介绍
DNA片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆
文库克隆载体介绍
用来构建所有这三种Ph.D.文库的载体，M13KE，是可以购买到的。M13KE是M13mp19的衍生株，其pIII基因的5’端构建了限制性酶切位点，用户可以将设计好的人工基因盒（synthetic cassette）插入此处构建自己的肽库。因为M13KE是噬菌体，而不是噬菌粒载体，所以在已加
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
实验方法原理 实验材料 包含lacZ融合基因的酵母菌株 试剂、试剂盒
酵母菌载体与克隆基因表达产物的检测
构建LacZ融合载体研究酵母菌基因调控。由于这种检测方法简便而且灵敏度高，因此，酵母菌基因经常以LacZ基因的功能 部分作标签，来指示待研究酵母菌基因的表达调节功能。融合蛋白被这样构建：酵母基因的启动子加上这个基因编码蛋白的N端的几个氨基酸残基融合在LacZ基因的羧基 端，由此编码的蛋白质片段仍保