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磷酸酶制备实验——膜蛋白酪氨酸磷酸酶（PTP）

试剂、试剂盒提取缓冲液仪器、耗材微型离心机Superose 6 柱子实验步骤1. 用 1 ml 含有 1% NP-40 去污剂的提取缓冲液提取颗粒部分（按照上面组织/细胞的制备和提取所述方法准备）15 分钟，用一个小匀浆器固定在微型离心管里匀浆或者通过微量移液器吸头尖反复吸入和排出悬浮液以确保沉淀分散。2. 在 13000 g 的冷冻微型离心机中离心悬浮液 10 分钟。3. 上清加到 1.0cm x 28 cm 的 Superose 6 柱子（Pharmacia) 上，柱子用含有 0.1% NP-40 的层析缓冲液平衡，并在 8 ml/h 的流速中洗脱，以 0.5 ml 为单位收集。PTP 以一个单峰紧随排阻蛋白（空柱体积）之后，PTP 分子量大约为 150 kDa。PTP 可以通过测试或免疫印迹法检测。4. 按照上面所述透析主要活性部分（总数为 3~4 ml)，除了用提取缓冲液替代层析缓冲液外，溶液中不应含有氯化镁。展开......阅读全文