影响考马斯亮蓝法测定蛋白质的因素

1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg.这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多.(2)测定快速、简便,只需加一种试剂.完成一个样品的测定,只需要5分钟左右.由于染料与蛋白质结合的过程,大约只要2分钟即可完成,其颜色可以在1小时内保持稳定,且在5分钟至20分钟之间,颜色的稳定性最好.因而完全不用像Lowry法那样费时和严格地控制时间.(3)干扰物质少.如干扰Lowry法的K 、Na 、Mg2 离子、Tris缓冲液、糖和蔗糖、甘油、巯基乙醇、EDTA等均不干扰此测定法.此法的缺点是:(1)由于各种蛋白质中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,因此Bradford法用于不同蛋白质测定时有较大的偏差,在制作 标准曲线时通常选用 g—球蛋白为标准蛋白质,以减少这方面的偏差.(2)仍有一些物质干扰此法的测定,主要的干......阅读全文

考马斯亮蓝的染色特性

蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡,完成反应十分迅速;其结合物在室温下1h内保持稳定。该法是1976年Bradford建立,试剂配制简单,操作简便快捷,反应非常灵敏,灵敏度比Lowry法还高4倍,可测定微克级蛋白质含量,测定蛋白质浓度范围为0~1 000μg/mL,是一种

快速考马斯亮蓝染色实验

实验材料单向凝胶电泳分离后的蛋白样品仪器、耗材微波炉微波炉专用塑料容器实验步骤一、凝胶染色1.电泳结束后,将凝胶置于盛有试剂 A 的微波炉专用塑料容器中,试剂 A 的量要足够覆盖整块凝胶。例如,一块典型的 mini 胶(8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm) 需用 IOOml 的试剂 A。2

考马斯亮蓝溶液的配制

教给你一种新配法染色液配制:1mol/l盐酸溶液(a),1g/lcbbg250溶液(b);应用时用1mla液和15mlb液混合加水至1l,搅拌混匀。注意,关键所在是应用的时候再混合,不要配好等着染色。就不会出现你说的那种现象了。

蛋白质定量检测方法——考马斯亮蓝法

考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250 从吸收峰为

考马斯亮蓝法测蛋白浓度,具体步骤

该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的,但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0.2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。1.Bradford浓染液的配制:将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50m1 95%乙醇,加入100ml浓磷酸,然后

蛋白质含量测定实验——考马斯亮蓝法

实验方法原理考马斯亮蓝显色法的基本原理是根据蛋白质可与考马斯亮蓝G-250 定量结合。当考马斯亮蓝 G-250 与蛋白质结合后,其对可见光的最大吸收峰从 465nm 变为 595nm。在考马斯亮蓝 G-250 过量且浓度恒定的情况下,当溶液中的蛋白质浓度不同时,就会有不同量的考马斯亮蓝 G-250

蛋白质标准曲线的制作(马斯亮蓝法)

一、实验目的和内容目的: 学习考马斯亮蓝(Coomassie Brilliant Blue)法测定蛋白质浓度的原理和方法内容:制作测定蛋白质浓度的标准曲线。制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。考马斯亮蓝法测定蛋

传统的考马斯亮蓝染色实验

实验材料经单向凝胶电泳或双向凝胶电泳分离后的蛋白样品试剂、试剂盒乙酸考马斯亮蓝染料脱色液仪器、耗材塑料容器实验步骤1.电泳结束后,将凝胶置于盛有 CBR-250 的塑料容器中,容器中 CBR-250 的量要足够覆盖整块凝胶。例如,一块典型的 mini 胶(8 cmX10 cm 或 8 cmX8 cm

考马斯亮蓝染色试剂盒

  考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)   简介:   本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝   R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转

蛋白质含量的测定实验——考马斯亮蓝法

实验方法原理考马斯亮蓝G250 在酸性溶液时呈茶棕色, 最大吸收峰在465 nm。当与蛋白质结合后变成深蓝色, 最大吸收峰转至595 nm, 在1~100 μg/ ml 蛋白质浓度范围内成正比。实验材料蛋白质试剂、试剂盒考马斯亮蓝G250乙醇碳酸钠氢氧化钠硫酸铜酒石酸钠钨酸钠钼酸钠蒸馏水磷酸浓盐酸硫

蛋白质含量测定法考马斯亮蓝法(Bradford法)

  本法系依据在酸性溶液中考马斯亮蓝G250与蛋白质分子中的碱性氨基酸(精氨酸)和芳香族氨基酸结合形成蓝色复合物,在一定范围内其颜色深浅与蛋白质浓度呈正比,以蛋白质对照品溶液作标准曲线,采用比色法测定供试品中蛋白质的含量。  本法灵敏度高,通常可测定1~200μg的蛋白质量。本法主要的干扰物质有去污

标准曲线制作—考马斯亮蓝法测蛋白质含量

一、标准曲线一般用分光光度法测物质的含量,先要制作标准曲线,然后根据标准曲线查出所测物质的含量。因此,制作标准曲线是生物检测分析的一项基本技术。 二、蛋白质含量测定方法 1、凯氏定氮法 2、双缩脲法 3、Folin-酚试剂法 4、紫外吸收法 5、考马斯亮蓝法 三、考马斯亮

用考马斯亮蓝R-250染色

用考马斯亮蓝R-250染色1.凝胶的固定液中轻微摇荡至少1小时。2.凝胶在染色液中摇荡过夜或至少1小时。3.胶在脱色液中摇荡过夜或至少1小时以消除背景。4.凝胶放于保存液中至少4小时以进一步脱色。在最初的1小时内换两次溶液,以后每一小时换一次溶液。5.封好的胶置于保存液中,4℃下最少可保存5年。

考马斯亮蓝的主要用途

考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。

常用生物染色剂:考马斯亮蓝

考马斯亮蓝有G250和R250两种,在颜色索引(Colour Index)中给出了不同的编号(42655和42660)。亮蓝G和亮蓝R在冷水中分别为微溶和不溶,在热水和乙醇中分别为可溶和微溶。两种染料均能对固定的蛋白进行有效地染色,使用浓度为溶于甲醇:冰醋酸:水(50:10:40)的0.05%溶

一文了解细胞骨架的考马斯亮蓝法观察

  狭义的细胞骨架(cytoskeleton)概念是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系(微管(microtubule, MT)、微丝(microfilament, MF )及中间纤维(intermediate filament, IF )组成的体系)。它所组成的结构体系称为“细胞骨架系统”,与细胞内的遗

考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)

考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)简介:本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的检

考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)

  考马斯亮蓝染色试剂盒(常规法)   简介:   本考马斯亮蓝染色试剂盒(Commassie Blue Staining Kit)采用了最经典的考马斯亮蓝染色和脱色方法,以考马斯亮蓝   R250为染料,可用于SDS-PAGE或非变性PAGE等蛋白电泳凝胶的常规染色和脱色,或Western转

考马斯[亮]蓝染色剂的作用特点

中文名称考马斯[亮]蓝英文名称coomassie [brilliant] blue定  义广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

考马斯[亮]蓝染色剂的应用特点

中文名称考马斯[亮]蓝英文名称coomassie [brilliant] blue定  义广泛用于对电泳蛋白质染色的蓝色染料。也可显示出细胞骨架及蛋白质在细胞中的显微分布。应用学科细胞生物学(一级学科),细胞生物学技术(二级学科)

考马斯亮蓝溶液可以长时间存放么

不可以的 会变质的 那就是隔段时间测样品蛋白含量的时候,必须重新作标曲了再测了?qwk123(站内联系TA):D;):(杨丹8918(站内联系TA):tiger13:王会征(站内联系TA)没问题啊,我放半年多了照样使用啊。silicare(站内联系TA)你是说考马斯亮蓝,还是加了蛋白之后的考马斯亮蓝

考马斯亮蓝溶液为什么不能长期保存

教给你一种新配法染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。应用的时候再混合,不要配好等着染色。就可以延长保存时间了。

考马斯亮蓝G250溶液的配制

染色液配制: 1 mol/ L 盐酸溶液(A) ,1 g/ L CBB G250 溶液(B) ; 应用时用1 ml A 液和15 ml B 液混合加水至1 L , 搅拌混匀。注意,关键所在是应用的时候再混合,不要配好等着染色。就不会出现你说的那种现象了。

蛋白胶染色,您还在用考马斯亮蓝?

  无需加热,2分钟显色,10分钟完成染色,无需脱色即可观察!聚合美蛋白染色试剂“染立显”超敏超速无毒不加热蛋白染胶液(货号:MF767),不含甲醇乙酸,安全无毒,灵敏度高,可用于SDS-PAGE胶(变性)及Native胶(非变性),也可以用于Western转膜后PAGE胶上残余蛋白的染色。  蛋白

蛋白质染色实验——考马斯亮蓝染色

蛋白质染色可用于(1)蛋白质的观测(2)蛋白质含量的测定。实验方法原理1. 凝胶中蛋白质的定位可用考马斯亮蓝染料染色或银染色。前者简便且快捷,而银染法具有相当高的灵敏度,能用于检出更少量的蛋白质。2. 蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化,从而改变这些染料的光吸收。在些基础上发展了蛋白

蛋白质定量/蛋白质含量的测定(考马斯亮蓝法)

实验概要运用考马斯亮蓝法测定蛋白质的含量。实验原理考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色,当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内(0~100μg/ml),蛋白质-色素结合物在595

考马斯亮蓝的结构和化学性质

Coomassie brilliant blue G-250分子结构如图《Coomassie brilliant blue G-250》。考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。游离状态的考马斯亮蓝G250 在酸性溶液中呈蓝偏绿色,与蛋白质结合后呈蓝色,蛋白质含量与颜色的深浅成正比,经595nm 测

各级分蔗糖酶活性测定及纯化率计算实验_考马斯亮蓝法

用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度,本实验中,蔗糖酶的活力单位指在一定条件下反应5 min,每产生1毫克葡萄糖所需酶量。本实验旨在测定各级分的蛋白质含量及蔗糖酶活性。实验方法原理用测定生成还原糖( 葡萄糖和果糖) 的量来测定蔗糖水解的速度, 本实验中, 蔗糖酶的活力单位指在一定

蛋白质定量实验_考马斯亮蓝蛋白质浓度分析法

实验方法原理蛋白质分子中的芳香族氨基酸酪氨酸、苯丙氨酸和色氨酸残基,其化学结构中的共轭双键,具有吸收紫外光的特性,吸收高峰在280 nm处,蛋白质溶液的吸光度(A280)与蛋白质含量成正比关系,可作为样品中蛋白质定量测定。该方法简便、灵敏、快速,且样品用量少且可回收,低浓度的盐类也不干扰测定,但测定

考马斯亮兰法的实验优点

(1)灵敏度高,据估计比Lowry法约高四倍,其最低蛋白质检测量可达1mg。这是因为蛋白质与染料结合后产生的颜色变化很大,蛋白质-染料复合物有更高的消光系数,因而光吸收值随蛋白质浓度的变化比Lowry法要大的多。(2)测定快速、简便,只需加一种试剂。完成一个样品的测定,只需要5分钟左右。由于染料与蛋