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microRNA的实时定量茎环RTPCR技术（一）

摘要：已开发出一种新型的microRNA（miRNA）的定量方法，即利用茎环反转录，Taqman PCR分析。茎环RT引物在RT 效率和特异性方面比传统的更好。TaqMan miRNA的检测是很具体的，可以检测成熟miRNA和区分相关的甚至低至一个核苷酸的miRNAs。此外，他们不会受到基因组DNA污染的影响。精确量化可以从低至25皮克的总RNA中提取大多数miRNA。 事实上，这种方法灵敏度高，特异性强和精密度高，允许无需核酸纯化，直接分析单个细胞。如标准TaqMan基因表达分析，TaqMan miRNA的检测显示出了7个数量级的动态范围。七个小鼠组织中五个miRNA定量显示，在每个细胞中，有低至10到超过30000个拷贝数。这种方法可以确保快速，准确，灵敏miRNA表达谱，并能识别和监控特定组织或疾病的潜在生物标志物。茎环RT-PCR可用于其他小RNA分子，如短干扰RNA（siRNAs）的量化。此外，为更好的特异性和效率......阅读全文