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试剂、试剂盒 寡核苷酸引物cDNA 文库HerculesHot-Start 聚合酶HerculesHot-Start 聚合酶缓冲液dNTP 溶液TE反转录缓冲液RNasinSuperscript II 逆转录酶生物素标记的引物 Ptotal帽子发现接头引物poly(A)+RNA仪器、耗材 热循环仪链霉抗生物素蛋白磁性珠磁性分离器水浴或加热仪实验步骤 试剂5'RACE 能否成功依赖于帽子发现接头序列结合在 cDNA 合成的起始处。这一步依赖于在第一链 cDNA 末端附加额外的寡核苷酸（dC)。已有证据显示，反转录缓冲液如果存在Mn2+，能大大提高这一步的效率（SchmidtandMueller1999)。第 1 阶段：反转录产生 cDNA 模板一、材料1. 缓冲液、溶液和试剂dNTP 溶液（含 4 种 dNTP, 各 10mmol/L)TE(10 mmol/LTris-HCl、pH7.5，1mmol/LEDTA、p......阅读全文
实验概要利用RACE(利用PCR技术快速扩增全长mRNA)技术构建全长cDNA文库是传统C库构建技术的改进。本实验即是利用寡核苷酸帽法，进行全长C库的构建，从而掌握RACE技术的原理与基本操作方法。实验原理其原理是利用真核mRNA的3’poly(A)和5’帽子结构作为标签，用通用引物识别并配对标签序
摘 要： RACE是一种快速克隆cDNA末端的方法，目前, 该方法被广泛应用于未知碱基序列基因的克隆，尤其是SMART RACE技术更为人们所青睐。本文总结了我们实验室用SMART RACE技术克隆基因的一些心得体会，希望对用RACE方法克隆基因的同行有些帮助。关键词： RACE; RN