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以AtT20脑垂体细胞作为模型进行神经内分泌肽能...(二)

4 免疫印迹(1) 硝酸纤维素膜(Bio-Rad)。(2)Towbin 缓冲液: 25 mmol/L Tris, 192 mmol/L 甘氨酸, 0.1% SDS, 2 0 % (V/V) 甲醇。(3)IX T ris 缓 冲 盐 溶 液(1XTBS): 10 mmol/L Tris-. HCl, pH 8_0, 150 mmol/L NaCl(4) TBS——T : I X TBS, 0.1% Tween-20。(5)5 % 脱脂牛奶溶液: TBS^T , 5 % 脱脂牛奶。(6)ECL™ 抗兔抗体,辣根过氧化物酶链接的 F Ub’)2 片 段(来自驴)( AmershamBiosciences)„(7)Western Lightning 化学发光试剂(PerkinElmer, Boston, MA)。二、方法1 样本制备(1)将 AtT2 0 和 AtT20 (proSAAS) 细 胞 用 150 m m 的 培 养 皿......阅读全文

以AtT20脑垂体细胞作为模型进行神经内 分泌肽能...(一)

以AtT20脑垂体细胞作为模型进行神经内 分泌肽能系统干扰中的蛋白质组学分析实验实验步骤 一、材料1 细胞培养和裂解(1)小鼠脑垂体 AtT20 和 AtT20 (proSAAS) 细胞系。 AtT20 .(proSAAS) 细胞系通过用包含一个新霉素抗性基因的 proSAAS 表达载体转染