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顽拗性植物组织的蛋白质组学研究（苯酚法提取蛋白质）

实验材料植物组织试剂、试剂盒苯酚提取缓冲液沉淀液等电聚焦缓冲液仪器、耗材低温粉碎机实验步骤3.1 蛋白质提取( 1 ) 新鲜植物组织在液氮中冷冻，然后在自动低温粉碎机中预先冷却的钢杯中将材料研磨成细碎的粉末（见注释 4) 。( 2 ) 在一个 15 ml 的离心管（falcon tube) 中加入 3 ml 提取缓冲液，并加入 1 g 研碎的植物组织，涡旋后在冰浴中振荡 10 min ( 见注释5) 。( 3 ) 加入等体积的 Tris 饱和苯酚，室温下振荡 10 min ( 见注释 6)。( 4 ) 样品在 5500 g 和 4°C 的条件下离心 10 min，从上到下分成有机相，水相和沉淀的不溶物质（见注释 7) ，小心地将最上层的苯酚转移到新的离心管中，注意避免触碰到中间层。( 5 ) 含蛋白质的苯酚液中加入 3 ml 的提取缓冲液进行反萃取（ back- extract) 。振荡 3 min 后涡......阅读全文