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植物组织RNA提取的要点与技巧

从植物组织中提取RNA 是进行植物分子生物学方面研究的必要前提。要进行Northern杂交分析,纯化mRNA 以用于体外翻译或建立cDNA文库,RT-PCR及差示分析等分子生物学研究,都需要高质量的RNA 。因此,从植物组织中提取纯度高、完整性好的RNA 是顺利进行上述研究的关键所在。从文献报道上看,有许多植物就是由于未能有效地分离纯化其组织中的RNA ,而阻碍了其分子生物学方面研究的进展。一般认为在这些植物组织中,或富含酚类化合物,或富含多糖,或含有某些尚无法确定的次级代谢产物,或RNase的活性较高。在完整的细胞内这些物质在空间上与核酸是分离的,但当组织被研磨,细胞破碎后,这些物质就会与RNA 相互作用。酚类化合物被氧化后会与RNA 不可逆地结合,导致RNA 活性丧失及在用苯酚、氯仿抽提时RNA 的丢失,或形成不溶性复合物;而多糖会形成难溶的胶状物,与RNA 共沉淀下来;萜类化合物和RNase会分别造成RNA 的化学降解和酶......阅读全文

植物组织总RNA的提取

实验概要由于RNA分子的结构特点,容易受RNA酶的攻击反应而降解,加上RNA酶极为稳定且广泛存在,因而在提取过程中要严格防止RNA酶的污染,并设法抑制其活性,这是本实验成败的关键。所有的组织中均存在RNA酶,人的皮肤、手指、试剂、容器等均可能被污染,因此全部实验过程中均需戴手套操作并经常更换(使用一

RNA提取心得(组织RNA提取和培养细胞的RNA提取)

一.组织RNA提取 1.最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。 2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80℃或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4℃,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用 DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后

动植物组织总RNA提取(Trizol法)和mRNA提取

一、材料  水稻叶片或小鼠肝组织。 二、设备   研钵,冷冻台式高速离心机,低温冰箱,冷冻真空干燥器,紫外检测仪,电泳仪,电泳槽。    三、试剂   1、无RNA酶灭菌水:用将高温烘烤的玻璃瓶(180℃ 2小时)装蒸馏水,然后加入0.01%的DEPC(体积/

植物总RNA的快速提取与纯化

一、原理RNA包括rRNA、tRNA和mRNA等,大部分通常是以核蛋白复合物的形式存在的。通过SDS、苯酚处理使蛋白质变性并沉淀。利用LiCl溶解双链DNA的特性去除DNA,经乙醇沉淀得到总RNA。纯度高、完整性好的RNA,即可用于Northern杂交、纯化mRNA、cDNA合成和体外翻译等进一步的

从富含多糖的植物组织中提取和纯化 RNA

实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时,可产生无 RNase 的环境□组织抽提后,以中等转速离心匀浆液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿将上清液抽提出,RNA 位于水相,DNA 和蛋白质位于苯酚相和两相交界面。用乙酸钾将位于水相的多糖选择件的沉淀出来,然后用氯化锂选

从富含多糖的植物组织中提取和纯化 RNA

            实验方法原理 硫氰酸胍能溶解细胞并使蛋白变性. 当用于抽提缓冲液时,可产生无 RNase 的环境□组织抽提后,以中等转速离心匀浆液,以除去小溶性多搪。用苯酚:氯仿将上清液抽提出,

植物组织中DNA的提取与测定

一、原理 脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid,DNA)是一切生物细胞的重要组成成分,主要存在于细胞核中,盐溶法是提取DNA的常规技术之一。从细胞中分离得到的DNA是与蛋白质结合的DNA,其中还含有大量RNA,即核糖核蛋白。如何有效地将这两种核蛋白分开是技术的关键。D

提取植物rna方法

  提到RNA的提取,是不是充满了心酸和无奈呀,抽提过程中已十分小心谨慎了,但是有时候还是会出现RNA污染、降解的悲剧。别怕,今天小编给您介绍一种新的RNA提取方法,比以前的方法更快、更有效和更可靠,让您从此不用再担心的RNA的抽提了。  众所周知:获得纯净、完整的RNA样品,是对一种植物的活性基因

植物RNA提取实验

实验方法原理 独特的裂解液/β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA酶,植物RNA助提剂PLANTaid帮助结合多糖多酚并通过离心去除,然后用乙醇调节结合条件后,RNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,再通过一系列快速的漂洗-离心的步骤,去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物,蛋白等杂质去除,

植物RNA提取实验

直接研磨法 液氮研磨法             实验方法原理 通过裂解液β-巯基乙醇迅速裂解细胞和灭活细胞RNA