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利用核苷酸交换和剪切技术进行DNA碎裂和定向进化实验3

3.6 纯化片段的定量为了分析和比较纯化得到的 DNA 的产量，我们首先使用 SYBR Greenn 试剂来定量。因为 NExT DNA 混编方法的重复率很髙，我们只定量一次即可（见注 16 )。通常我们都能获得浓度为 40~60 ng/μl 的 DNA 片段。( 1 ) 取 2 μl 纯化的 DNA 片段（见 10.3.4)，加入 50 μl 1 : 5000 稀释的 SYBR GreenII 溶液染色，此染色液对单链 DNA 非常敏感（见注 17) 。( 2 ) 在暗箱中反应 5 min 后检测荧光信号（我们使用 96 孔的 Perkin Elmer LS 50B 荧光粉光光度计；见注 18)。染料的激发波长是 480 nm，可在 515 nm 检测发射值。( 3 ) 使用片段大小范围内的标准寡核苷酸，稀释不同的倍数绘制浓度标准曲线，标定片段所含 DNA 的浓度。3.7 基因重组装和扩增通过内部引物延伸反应从纯化......阅读全文