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westernblot实验中印迹膜和凝胶出现的问题及解决方案

Western blot是生物化学和免疫遗传学中常用的一种蛋白分析方法,其技术环节多,操作时间长,哪一步出现问题,都会影响最后的结果,今天小编总结了WB中印迹膜和凝胶中出现的问题及解决方案,希望可以帮助在WB中苦恼的小伙伴。 问题:波浪式的环绕条带 引起原因:转印不均匀 解决方法:当组装三明治结构时,要确保转印堆叠各部分紧密地连接在一起。可能需要更换海绵垫,以达到适合的松紧度。 问题:条带是波浪型的,微笑的,歪斜的 引起原因: 1.在样本中可能有细胞碎片或者DNA 2.上样buffer不新鲜或者含有太多盐成分。 3.运行凝胶太快,导致凝胶升温,降解聚合物。 解决方法: 1.增加超声步骤 2.延长加热时间 3.离心 4.尝试准备新鲜的缓冲液,使用不同类型的缓冲液,或通过稀释、透析/微透析或色谱法降低样品缓冲液的盐浓度。 6.选择适当的缓......阅读全文

Western Blot中抗体的选择

Western Blot又称为蛋白质印迹,是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的基于抗体抗原之间特异免疫反应的一种定量或定性检测蛋白的实验方法。基本原理:聚丙烯酰胺凝胶电泳将不同分子量的蛋白质样品分离,分离后的蛋白被转移到固相支撑物(杂交膜)上,抗体特异性识别目标蛋白,通过酶促反应或者化学发光等

蛋白质印迹技术30年“进化”史

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。   有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western

新技术助蛋白质转印法提速

  在发明蛋白质印迹法(Western Blot)出现了30多年之后,这项技术仍然是获取特定蛋白可靠鉴定的关键。许多近期涌现的产品利用各种方法来提高蛋白质印迹实验的可重复性、敏感性、定量性以及速度。  有三个人都被认为发展了蛋白质的免疫印迹方法,但其中只有一人才算得上是“Western B