ADVIA120血球分析仪的临床应用（二）

      以上众多项目，除了平时应用较多的WBC、Hb等外，我想重要介绍一下网织红细胞方面的应用。  

ADVIA120的网织红细胞和红细胞参数在临床中的应用

l      鉴别诊断

l      监测和早期诊断

l      预后判断

l      疗效观察

l      铁缺乏的检测

l      地贫和血红蛋白病

l      rHu-EPO治疗

l      大细胞性贫血

l      遗传性球形细胞增多症

l      镰状细胞性贫血

l      网织红细胞的概念：　

      网织红细胞(下称网红)是尚未完全成熟的红细胞，是晚幼红细胞脱核后到完全成熟之间的过渡细胞，由于其胞浆内尚存在有嗜碱性的RNA物质，经煌焦油蓝或新亚甲蓝活体染色后呈浅蓝或深蓝色的网状结构，因此得名为网织红细胞。网红是反映骨髓造血功能的重要指标，特别是在贫血中扮演著极其重要的角色。  

l      网红显微镜目测法，流式细胞网红计数仪，Bayer ADVIA-120分析仪的对照：

1.    网红显微镜目测法：

    迄今国内仍多采用显微镜目测法(下称目测法)，可直观细胞形态且不需昂贵设备，不失为诊治贫血的重要实验方法，但操作费工费时，受主观因素影响，计数精确性较差为其不足。

2.    网红流式细胞仪法(Flow cytometer,简称FCM)

    近年来，国外多使用自动分析仪代替目测法，无论从实验方法学还是临床应用，均取得了良好效果，早在1983年有专家就应用FCM方法学进行网红计数，且在血液病的鉴别诊断和疗效观察取得了满意的结果。并评价了FCM方法与目测法的实验结果，发现前者的测量精确度比后者明显提高。因为流式细胞仪(flow  cytometer，FCM)的问世，开创了生物细胞研究的新领域，  也为网红计数提供了快速、准确的测试手段，可以通过某些染料(如吖啶橙、派若宁-Y  、噻唑橙)与网红中RNA结合，在FCM方法测量时发出特定颜色的荧光，  进行单参数定量RNA，已知在红细胞发育过程中，RNA含量有明显规律性变化，即由原始阶段较为丰富逐渐减低至细胞完全成熟后消失或接近消失。网织红细胞为成熟红细胞前阶段，通过FCM方法检测RNA可精确表示网织红细胞占成熟红细胞的百分率(RET%)。网织红细胞计数仪的临床应用价值已被公认。但由于其仅能测试网织红细胞，常给临床诊断带来不便。  

3.    BAYER ADVIA-120全自动细胞分析仪检测网红的方法学

    1993年以来，可进行网红计数的血液分析仪相继问世，使血细胞分析仪应用进入了新的阶段，其代表公司有很多，（例如Coulter Maxm型，Sysmex SE系列等）而BAYER-120全自动细胞分析仪不但能检测有关白细胞、红细胞、血小板等等几十项测量参数，还可得到网织红细胞的实验参数。其的测试方法首先将样本与ADVIA-120的网红试剂混合，因网红测试中含有ＲＮＡ染剂ＯＸＵＺＩＮＥ　-７５０（即核酸染料：氧氮杂芑-750。）它可渗透到网状红细胞膜内，将细胞质内的ＲＮＡ加以染色，细胞质内含有ＲＮＡ的网状红细胞将被染成蓝色，且依照ＲＮＡ含量的多寡反应染色的程度。细胞膜内不含ＲＮＡ的红细胞与血小板则不被染色。再利用光学系统，经光电二极管的处理，低角度散射光可测定出血球体积，高角度散射光可测定血球血红蛋白浓度，吸光度变化的测量可以计算ＲＮＡ染色程度，利用以上三个测定值就可以测得完整的网织红细胞分析参数。其参数包括RET绝对值(网织红细胞计数)、网织红的百分数（RET%）、网红的平均体积(MCVr)、网红细胞分布宽度(RDWr)、单个网红内血红蛋白分布宽度(HDWr)、单个网红内平均血红蛋白浓度(CHCMr)、单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）低色素红细胞比率（%Hypo）,及根据荧光强度，还可将网织红细胞分成低荧光强度网织红细胞（Low  Fluorescent Reticulo- cyte 简称LFR）、中荧光强度网织红细胞（Middle Fluorescent  Reticulocyte简称MFR ）和高荧光强度网织红细胞（High Fluorescent Reticulocyte  简称HFR）三部分。幼稚的网红显示最强的荧光，反之成熟红细胞极少或没有荧光。为了评价ADVIA-120的有关精密度，重复性及速度以及它的线性范围。我科进行了重复多次的高，中，低值的测试，以及同目测法的对照，实践证明ADVIA-120能更准确地进行网红计数，且能快速地精确地检出目测法所不能的更多的有用的网红数据结果。 l      网织红细胞的有关正常参考值：

　我科以HGB120—160g/L ，MCV90—100fl，MCH27—34Pg作健康组用BAYER-120全自动细胞分析仪对300例正常人进行了分析，其结果见下表。

表1-1 300例正常人网织红细胞检测结果

l      网织红细胞的临床应用进展

     130年以前Feb观察到贫血病人的  RBC 中的颗粒并用苦味酸显示了它们，  而后Erhich用亚甲蓝染色后发现了网状结构并建立了网织红细胞目测法，一个多世纪以来这种方法在贫血的诊断、疗效估计、鉴别诊断中的重要作用众所周知，笔者不再赘述。现将仪器法进行网织红计数的临床应用简述如下。  

l      缺铁性贫血要点

    缺铁性贫血是呈典型的小细胞低色素贫血，它的红细胞，血红蛋白浓度均减少，并有贫血的临床表现，且平均血红蛋白浓度（MCHC）〈26Pg细胞平均体积（MCV）〈80fl，平均血红蛋白含量〈0.31Pg单个网红内血红蛋白含量（CHr）〈25Pg,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hypo）即M/H〈0.9可诊断为缺铁性贫血。缺铁性贫血是小儿的常见病，主要发生在6个月至3岁的婴儿。为了有效地诊断儿童缺铁的方法，我们经筛选将30例儿童，平均年龄2.9+/-2岁分为ß-地中海贫血，铁缺乏组（载铁蛋白饱和度TSAT〈20，〉及其它小细胞性贫血分为三组进行对单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hypo）即M/H作比较如下图1-2。从图中可明显看出单个网红内血红蛋白含量（CHr）,小红细胞比率（%Micro）/低色素红细胞比率（%Hyp）即M/H对缺铁性贫血是很好的指标。

l      网红的HFR，MFR，LFR的应用

我们以Hb 120～160g/L、MCV 90～100fl 、MCH 27～34pg的患者作为健康组；WBC<3×109/L、PLT<50×109/L 的化疗后红细胞生成抑制者为骨髓抑制组，以慢性溶血性贫血患者为溶贫组，I缺铁性贫血DA组、血液透析组，老年无贫血组（70  岁以上 Hb 120 ～160g/L、MCV 90～100fl、MCH 27～34pg）、老年贫血组（70岁以上Hb不足  110g/L且无明显病因的个体）测得的网织红细胞百分比、HFR ，MFR及LFR四项参数如下图可证实HFR 和LFR  可能是反映造血功能的关键的新参数的结论。与贫血组相似，  血液透析组HGB为100g/L或更低，HFR上升，LFR下降，但是RET数不升高；因此，可将网织红细胞计数及其分类作为鉴别诊断的初筛指标。我们还可以从图中可看出老年健康组与健康对照组具有相似的特征，说明这些参数无年龄差异。老年贫血组RET数减少，但RET%  却与健康组相似。上述结论在图中一目了然。图中依次为：健康组、骨髓抑制组、溶贫组、IDA组、血液透析组，老年无贫血组（70 岁以上 Hb 120  ～160g/L、MCV 90～100fl、MCH 27～34pg）、老年贫血组（70岁以上Hb不足 110g/L且无明显病因的个体）。

l      EPO治疗的监测

      EPO是促红细胞生成素的简称。它在管理功能性缺铁的肾脏病人中特别重要。大多数肾脏衰竭病人根据不同的贫血程度，其血色素浓度都异常地低，故现在医师也常用EPO治疗这些病人。当HGB下降、组织氧化受阻时，EPO生成增多，EPO   促使干细胞向原始红细胞分化，也加速网织红细胞释放。因此，EPO增加，HFR也增多，并伴有网织红细胞的增多。化疗后骨髓EPO功能恢复早期，HFR增多比网织红细胞总数恢复早，这种反应时间的不同体现了EPO与HFR之间的密切关系。对于EPO检测我们将作进一步的研究。