AFDIL：DNA测序技术鉴定

　　1972年，美国空军中尉Michael Joseph Blassie在越南战争中牺牲。因无法确认身份，Blassie的遗体被埋葬在无名烈士墓中，供人们瞻仰。直至1998年，经过线粒体DNA检测， Blassie中尉的遗体才得以确认，并运回家乡。从此，DNA测序开始在鉴定美国士兵残骸中发挥作用。

　　如今，美国武装部队DNA鉴定实验室(AFDIL)仍在从事这一方面的工作。每年，实验室对大约1200个骨骼样本的mtDNA进行测序，这些样本被认为是在战争中死亡的士兵残骸。

　　AFDIL的mtDNA部门的助理负责人Suni Edson表示：“我们有一人在阿富汗失踪，有1200人在越南失踪，8200人在韩国失踪，还有78,000人在二战中失踪。这么多人仍下落不明。”

　　为此，美军战俘与战争失踪人员联合调查司令部(Joint POW/MIA Accounting Command)一直在努力寻找因战争而长眠异国他乡的士兵遗体。

　　据AFDIL法医服务部门的副主任Timothy McMahon介绍，原先的FBI线粒体实验室每年只能处理100份标本。“我们几乎是美国乃至全世界唯一能达到每年处理1200份标本的实验室。”

　　为了实现这一点，AFDIL的研究人员优化了提取操作。研究小组修改了提取缓冲液，从2007年开始采用所谓的去矿化缓冲液(demineralization buffer)来改善提取效率。据Edson介绍，在那之前，成功率大约为88%，而如今，成功率达到96%。

　　去矿化缓冲液分解羟基磷灰石，将骨钙拉出，并开放骨细胞。最终，骨基质被完全溶解，让DNA提取成为可能。这样，修改后的方法将所需的骨骼样本量减少了10倍，从2 g减少到0.2 g。

　　“尽管采用以往的提取方法，我们能达到88%的成功率，但往往是较长的骨骼。如今，什么样的骨骼都行，”McMahon谈道。“在越南，大部分失踪士兵都经过坠机，高度片段化。采用这种方法，我们能检测越来越多的样本。”

　　但如今，最大的挑战之一是PCR抑制剂。有时，研究小组发现样本暴露在PCR抑制剂中，如土壤中的腐殖酸。有时，他们又会面临抑制PCR的脂溶性药物，如四环素，这种抗生素在朝鲜战争中很常见。现在，实验室又在开发一种提取方法，能去除这些抑制剂以及样本中的其他污染。

　　此外，实验室也在积极采用新一代测序技术来解决高度降解的棘手个案。他们在寻找让测序自动化的方法。据 McMahon介绍，仅去年一年，该部门就开展了110,000个测序反应，还是手动的。“很多人在做这个。如果我们能将他们解放出来，开展数据分析，那么我们能够更快地将结果反馈给JPAC。”