AnnexinVEGFP凋亡说明书

Annexin V-EGFP细胞凋亡检测试剂盒 (Annexin V-EGFP Apoptosis Detection Kit) 产品说明： 凋亡是一种程序性的细胞死亡，与细胞的坏死有生化和形态等方面的不同。磷酯酰 丝氨酸(phosphatidylserine, PS)是细胞膜的一种组成成分，在正常细胞主要分布在细 胞膜内侧；细胞发生凋亡的早期，PS会外翻到细胞表面，即细胞膜外侧。Annexin V 对PS有高度的亲和力，可以选择性结合和标记PS。本试剂盒采用重组人Annexin V-EGFP融合蛋白，来检测细胞凋亡时出现在细胞膜表面的PS，标识出凋亡细胞。由 于坏死细胞和凋亡晚期细胞，其膜内侧的PS也可以被Annexin V结合，通常用另一种 活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)进行双重染色，以区别凋亡 早期细胞与坏死细胞和凋亡晚期的细胞。用Annexin V-EGFP和PI染色后，正常的活 细胞不被Annexin V-EGFP和PI着色；凋亡早期的细胞仅被Annexin V-EGFP着色，PI 染色呈阴性；坏死细胞和凋亡晚期的细胞可以同时被Annexin V-EGFP和PI着色。用 流式细胞仪或荧光显微镜直接观察PS外翻这一细胞凋亡的重要特征，是一种快速简 便的细胞凋亡经典检测方法。 产品内容与储存方法： 名称 数量 保存条件 Annexin V-EGFP 40/100 μl 4℃ Propidium Iodide (PI) 10/25 μl 4℃ 4x Annexin V Binding Bufer (结合液) 5/15 ml 4℃ 试剂盒可作20/50次检测。常温运输，4℃避光保存。有效期6个月。 操作方法： 染色液的配制： 1) 取适量4x Annexin V结合液，用双蒸水稀释至1xAnnexin V结合液。后续工作均使 用1x Annexin V结合液。 2) 将20 μl Annexin V-EGFP加入1 ml Annexin V结合缓冲液中，即配成10次测试的 Annexin V染色液。 3) 将5 μl PI加入5 ml Annexin V结合缓冲液中，即配成10次测试的PI染色液。 荧光显微照相操作方法： 1) 培养细胞用所需方法处理以诱导凋亡。应同时设置阴性对照。 2) 对贴壁生长细胞，离心收取培养液内的悬浮细胞，并用胰酶消化贴壁细胞，合并 两部分细胞悬液；对悬浮生长细胞，直接收集细胞。用冰冷PBS洗涤细胞后， 1000g 离心5 min，弃上清，加入100 µl Annexin V染色液轻轻重悬细胞。室温(20-25℃)放 置，孵育10~15 min。再加入PI染色液0.5 ml混匀。室温孵育5 min 3) 完成孵育后，1000g离心5 min，弃上清，轻轻重悬细胞于50~100 µl Annexin V结合 缓冲液中；取25-50μl细胞悬液滴到一张显微载玻片上，再盖上一张盖玻片。