C反应蛋白的纯化研究及临床具体应用

C-反应蛋白主要在肝脏中合成，是人类最重要的急性时相反应的蛋白之一，成功分离纯化出人CRP，可用于进行生产研究。医学研究上的C-反应蛋白纯化常常包含在一些生物服务公司提供的蛋白纯化服务中。一些公司提供的蛋白纯化服务可以获得高纯度的蛋白质，可以满足蛋白质的折叠或重结晶等精细实验要求。

C-反应蛋白（CRP）是机体受到微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激时肝细胞合成的一种急性相蛋白，它是高度灵敏的炎症指标，在临床上具有感染的诊断与鉴别、抗生素的治疗监测、预测将来心肌梗塞与中风的危险性等作用。CRP在健康人血清中浓度很低，而在细菌感染或组织损伤时，其浓度显著（10倍甚至百倍）升高，而且上升和下降都很迅速。从临床血清样本分离纯化获得人C-反应蛋白（CRP），蛋白质纯化是一系列复杂的过程的组合，有粗分离、初步纯化和精细纯化等多个步骤。蛋白纯化服务方法有抽提、沉淀、离心、层析等多种服务手段。美迪西生物医药是一家临床前医药研发外包服务公司，可以根据客户要求提供蛋白纯化服务。

1、人C-反应蛋白纯化研究

蛋白纯化是将目标蛋白质从细胞裂解液的全部组分中分离出来，同时仍保留蛋白的生物学活性及化学完整性。运用盐析法、DEAE离子交换层析和亲和层析等方法从临床血清样本中分离纯化出CRP，用于免疫山羊制备多克隆抗体，初步建立免疫透射比浊法测定CRP并进行评价。SDS-PAGE结果显示纯化产物出现相对分子质量约为23000的主带，Western Blotting结果显示纯化产物能与CRP单克隆抗体发生特异性结合，证实纯化产物为CRP，与商品CRP有很好的可比性性。以自提CRP制备出效价高、特异性强的多克隆抗体，运用该抗体建立的CRP免疫透射比浊法具有比较好的性能。而成功分离纯化出人CRP，可用于进行生产研究。

2、C-反应蛋白在临床上的应用

（1）肺炎、支气管炎和心梗等疾病的诊断

对疑似肺炎者，C-反应蛋白被认为是筛查的第一线检查方法，CRP大于60mg/L常提示为细菌性肺炎。急性支气管炎很少源于细菌感染，也很少导致C-反应蛋白显著升高。所以CRP测定可以帮助鉴别肺炎和支气管炎。

急性心梗时CRP升高，在无溶栓治疗时与梗死范围呈正相关。在与梗塞有关的冠状动脉完全堵塞时CRP更高。广泛梗死时C-反应蛋白平均160mg/L；局部梗死时C-反应蛋白平均60mg/L。

（2）细菌感染和病毒感染的诊断

当发生各种感染性疾病时，其组织损伤物质及炎症物质大量进入血液循环，通过相应的细胞因子介导刺激肝脏合成CRP，导致机体反应的CRP升高。细菌的内毒素是急性时相反应的最有效的刺激，所以最高水平的CRP可发生在革兰阴性菌感染，有时高达500 mg／L。革兰阳性菌感染、寄生虫感染通常会引起中等程度的反应，典型的是在100 mg/L左右。

但病毒不具有完整的细胞结构，CRP不能与之结合，所以病毒感染时一般轻度或不升高。但腺病毒及某些疱疹病毒可造成较大的组织损伤使得C-反应蛋白轻度增高。病毒感染一般低于10 mg/L ，通常不超过50 mg/L。

CRP在细菌感染发生后4～6小时即开始升高，36～48小时达到高峰，因为CRP半衰期只有4 - 7小时，所以在感染控制后其含量急骤下降，3-7天内可恢复正常。细菌感染，CRP含量一般高于20 mg/L。

CRP为急性时相反应蛋白，在感染时反应速度快，与WBC感染指标相比，CRP更加敏感。而且CRP不受生理，免疫状态，药物治疗等影响。所以CRP为鉴别细菌感染与病毒感染的首选指标。可在感染早期可靠地判断究竟是细菌感染还是病毒感染，以决定是否进行抗生素治疗。

（3）新生儿与老年患者感染性疾病的诊断

CRP在儿科感染疾病应用的分界值为<10mg/L，新生儿感染分界值为2mg/L，大于32mg/L常提示感染。如不是新生儿，病程大于6-12小时，CRP<10mg/L可基本排除细菌感染或细菌已被清除。若>25mg/L常提示细菌感染。老年人可能有感染较早却无发热、白细胞升高等情况，这时测C-反应蛋白有助于检出细菌感染。

（4）评价抗生素治疗效果的指标

CRP是评价抗生素治疗效果的独立指标，可以很好地用来检测急性细菌感染及判定抗生素疗效，在粒细胞缺乏或作免疫抑制疗法时尤为适用。对抗生素治疗患者，在抗生素治疗前和治疗后24h、治疗结束前各作常规检测一次。对抗菌治疗有良好反应的患者，其CRP值的下降非常迅速，通常24小时可以下降一半。CRP下降至正常时，中断抗生素治疗。

（5）预测将来心肌梗塞与中风的危险性

CRP是心血管疾病最强的危险指标，美国疾病控制预防中心建议其用于心血管疾病预防筛选指标，可预测将来急性心梗及中风的危险性。低度风险：<1mg mg/L；中度风险1-3 mg/L；高度风险3-10 mg/L；大于10 mg/L，可能存在感染，应治疗后复查。

CRP含量>2.1mg/L的人与<1mg/L者比较：将来发生心肌梗塞的危险性为后者的2.9倍；发生缺血性中风的危险性为后者的1.9倍；发生外周动脉血管性疾病的危险性为后者的4.1倍。

（6）用于自身免疫性疾病的诊断

SLE、多肌炎、混合性结缔组织病、溃疡性结肠炎，CRP轻度升高或不升高。如果SLE患者CRP显著升高强烈提示并发了细菌感染，而与病情活动程度无关。而类风湿关节炎患者CRP水平与疾病的严重程度、关节的咬合程度及受累关节数相关。

（7）恶性肿瘤的诊断

恶性肿瘤患者CRP大都升高。如CRP与AFP的联合检测，可用于肝癌与肝脏良性疾病的鉴别诊断。CRP测定用于肿瘤的治疗和预后有积极意义，手术前CRP上升，手术后则下降。且其反应不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床估价肿瘤的进程。 

（8）外科疾病手术治疗后的观察

患者施行手术后24～72h血中CRP水平明显升高，约在第5～7天恢复正常。凡骤升后持续高水平甚至增高，应怀疑合并感染。对中、大手术患者，在术前和术后3～7天各作常规检测一次。急性阑尾炎的诊断常基于医生对临床症状的检查，误诊率较高，未穿孔者CRP轻度增高，在20mg/L以上。约15% - 25％阑尾穿孔病人CRP常超过100mg/L。如WBC和CRP均正常，则急性阑尾炎的可能性不大。CRP＞100mg/L提示可能穿孔。

（9）妇产科疾病的诊断

盆腔炎和子宫附件炎，CRP值升高。盆腔肿块和子宫肌瘤通常多为阴性。

（10）白血病患者并发感染

急性白血病患者合并感染的早期，中性粒细胞减低而诊断困难。所以这时候连续监测CRP对发现隐蔽性的细菌感染是一种非常有效的帅选试验。若CRP 显著升高（＞100mg/L）提示白血病患者合并感染，应及早使用抗生素。

最后需要说明的是，CRP是非特异性指标，在临床实际工作中要注意结合病史、症状、体征和其他辅助检查结果，综合分析病情。