“研究并明确生物药相关物质和杂质的种类、形成机制、影响因素，评估其对产品的作用或影响，并进行恰当合理的控制，是贯穿于整个生物药研发、生产周期中的重要工作。”【注】
电荷异质性是蛋白类药物的关键质量属性，电荷异构体可能来源于天冬酰胺脱酰胺、天冬氨酸异构化、琥珀酰亚胺形成、C端赖氨酸丢失、N端环化（焦谷氨酸形成）、唾液酸化和氧化等翻译后修饰，对重组蛋白类药物的稳定性、溶解性、免疫原性、体内外生物学活性和药物动力学功能发挥具有重要的影响。
阳离子交换色谱法（CEX）是研究蛋白类药物电荷异构体分析的关键技术。图1是蛋白类药物典型CEX图谱。对电荷异构体各峰进行鉴定，是药物深度表征研究的需求，也能够为研发中工艺开发提供技术支撑，指明优化的方向。
图1蛋白类药物典型CEX图谱
上海测简奕科技（以下简称“测简奕”）采用安捷伦在线二维液相色谱（图2所示），开发了在线2D-CEX-RP-LC QTOF MS方案，可以对CEX各电荷异构体峰做快速鉴定分析。目前，测简奕已为二十多家生物医药客户提供了CEX电荷异构体峰鉴定服务，项目数量超过50个，其中近20个已经进行IND申请。
图2 安捷伦在线2D-CEX-RP-LCMS系统
本文从以下四个方面阐述了做CEX峰“快速”鉴定的必要性和重要性：
为什么做CEX峰“快速”鉴定（Why）
哪些部门需要做CEX峰“快速”鉴定（Who）
什么时候做CEX峰“快速”鉴定（When）
怎么做CEX峰“快速”鉴定（How）
需要知道各峰形成的原因，满足药物申报深度表征的要求，或者为工艺优化指明方向；
离线收集各峰，再通过LCMS鉴定，花费的时间长，收集过程组分可能发生变化，需要快速地、更全面地对CEX峰进行分析；
CEX峰多，分离度不好，峰含量低，离线收集各峰难度大，需要高通量、高分辨率的方法。
质量研究和控制部门
工艺开发部门（细胞培养、纯化和制剂等）
药物申报时，需要对CEX峰做深度表征研究；
工艺开发过程，需要知道CEX峰的形成原因，从而明确工艺优化方向。采用”离线收集+鉴定“花费时间长，不能满足时效性要求；
离线收集不能准确鉴定峰的形成原因，需采用在线方式鉴定，以下两个案例均为这种情况
案例1：离线收集过程峰组分发生变化
案例1通过在线2D-CEX-RP-LCMS和离线CEX-RP-LCMS方案对图1中案例蛋白的碱性峰P6做了鉴定。通过在线2D-CEX-RP-LCMS检测，P6峰的主要分子量为148041Da，通过与蛋白主峰P3分子量（148058Da）比对，可以推测出P6主要是因为发生了天冬氨酸琥珀酰亚胺化形成的。而在离线收集P6