实验概要
Southern技术是指以Southern名字命名的DNA转移杂交技术。它可用于基因组特定DNA序列的定位，可以测定相关片段的同源性、可以从c库、基因组文库中筛选完整基因等。用一种或多种限制性内切酶对基因组DNA加以切割，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切片段，随后，使DNA在原位变性，并从凝胶转移至固相膜，用已知核苷酸片段加以标记作为探针，通过分子杂交来检测待测样品中是否存在互补的核酸序列。该技术已成为分子生物学中一类重要的检测手段。下面介绍利用DIG试剂盒进行杂交的方法。
主要试剂
变性液 ：0.5MNaOH、1.5MnaCl
中和液：0.5Mtris-HCL，pH7.0、3MnaCl
20×SSC溶液
预杂交液：Blocking溶液（试剂盒带）
杂交液（含5-25ng/ml，DIG标记探针的预杂交液）
low stringence buffer(2×SSC，0.1%SDS)
high stringence buffer(0.5×SSC，0.1%SDS)
洗涤液（0.1M马来酸，0.15MNaCL，pH7.5，0.3%Tween-20，）
抗体溶液（含1/5000的DIG标记碱磷酶的Blocking溶液）
平衡液（0.1MTris-HCl，0.1MNaCL pH 9.5）
显色液（平衡液中含2％BCIP/NBT储存液）
BCIP/NBT储存液(试剂盒带)
主要设备
分子杂交仪、摇床、 烤箱、取液器、电泳仪、电泳槽
实验步骤
1. 转膜
1) 电泳
2) 切胶 在紫外下，切取凝胶有条带部分
3) 脱嘌啉0.25NHCl浸泡凝胶10分钟，蒸馏水洗胶（大于15kb的DNA片段转移时做此步骤）
4) 变性，变性液（0.5MNaOH、1.5MNaCl）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶
5) 中和，中和液（0.5MTris-HCl，pH7.0、3MNACl）浸泡凝胶2次，每次15分钟，蒸馏水洗胶
6) 平衡，凝胶在20×SSC中室温平衡10分钟
7) 转膜，取一塑料盒，将一干净玻璃板横架于盒上，盒中倒入10×SSC，作为转移缓冲液，将2张大小合适的滤纸用20×SSC溶液浸湿，放置于玻璃板上，作为滤纸桥
将处理好的凝胶切去多余部分并切下一角作标记，胶面反转放置于滤纸桥上，四周用Parafilm膜封闭，以防短路
剪取一块面积稍大于凝胶的硝酸纤维素膜（NC膜），以2×SSC溶液浸湿后置于凝胶上
剪取2块相应大小的滤纸，以2×SSC溶液浸湿后置于NC膜上
（滤纸、凝胶、NC膜、滤纸间都不能有气泡）
滤纸上面放一叠吸水纸，上面压一块玻璃板，再压上500g左右的重物，转移过夜
8) 烤膜，转移结束后，NC膜在与凝胶切角相对处，用铅笔做记号，用6×SSC溶液室温漂洗5分钟，以充分洗去沾上的凝胶成分，吸水纸吸干残余液体，室温晾干，NC膜用滤纸夹裹好，80℃烤膜2小时
9) 烤干的NC膜用２×SSC浸润。
2. 杂交
1) 预杂交，将烤好的NC膜放入一个比膜稍大的塑料袋中，按100cm2/10ml的比例加入适量的预杂交液，赶走气泡，封口机封口，42℃预杂交30分钟
2) 杂交，倒掉预杂交液，按100cm2/10ml加入杂交液，42℃杂交过夜
3. 检测
1) 准备好一个塑料盒，放入100mllow stringence buffer，将杂交后的NC膜取出，置于上述溶液中，室温晃动5分钟
2) 取新鲜的low stringence buffer，重复上述操作一次
3) 将NC膜取出，置于65℃预热的100ml high stringence buffer，65℃晃动15分钟
4) 取新鲜的high stringence buffer，重复操作一次
5) 将NC膜转移至塑料盒中，内含洗涤液，室温晃动2分钟，倒掉洗涤液。
6) 加入100mlBlocking溶液，室温晃动30分钟，以除去没有特异结合的探针，倒掉Blocking溶液
7) 加入20ml抗体溶液，室温晃动30分钟，倒掉溶液
8) 用洗涤液室温晃动洗涤2次，每次15分钟，以除去多余的抗体，倒掉洗涤液
9) 平衡，加入20ml平衡液，室温放置3分钟，倒掉平衡液
10) 显色，加入10ml显色液，显色，目标条带显色后用50mlTE终止反应。