DNA探针的标记实验

实验方法原理 分子杂交是核酸链以碱基配对规则的一种结合方式，是核酸的重要理化特性。利用分子杂交这一特性来对特定核酸序列进行检测，必须将杂交链中的一条用某种可以检测的进行标记，这条链就称为核酸探针。因此，核酸探针的制备是分子杂交技术的关键。放射性同位素标记是最早采用的也是目前最常用的核酸探针标记方法。

实验材料 DNA

试剂、试剂盒 EGFR-PCR产物washing bufferDetection bufferTE buffe

仪器、耗材 eppendorf管Tip头PCR仪 镊子无粉手套量加样器

实验步骤

1.  灭菌去离子水稀释1 ug DNA至总体积16 ul。

注意事项

1.  用于标记的DNA模板尽可能纯化，以提高标记效率

2.  模板DNA>100 bp。

3.  经DIG标记的探针不能用酚/氯仿抽提纯化

4.  根据说明书确定标记效率（标记探针及试剂盒阳性对照DIG标记DNA梯度稀释，尼龙膜点样，样本变性，封闭，杂交，现色定量）。

5.  本法亦可用于单链DNA或RNA探针的标记，当标记RNA探针时，需采用逆转录酶，收获产物为标记的单链cDNA。

6.  可根据下表标记产物。