DNA的提取实验

实验方法原理 酚为有效的蛋白质变性剂，并且饱和的酚与水相有效的分开．因此，在含核酸的样品加入酚，可将样品中的蛋白质变性后形成沉淀层，位于水相与有机相的界画，从而达到纯化核酸的目的．但酚不能完全抑制RNA酶的活性，而且酚层中含有10－15%的水,从而溶解一部分poly－（A）RNA。将酚与氯仿联合使用即可克服这两方面的不足．氯仿除可使蛋白质变性外，还能加速水相与有机相的分层．在氯仿中加入少许异戊醇可减少油提生产生的泡沫．在酚－氯仿联合抽提核酸后，再加氯仿抽提一次；可除去样品中的痕量酚．

试剂、试剂盒 熏蒸酚氧仿异戊醇氯仿异戊醇混合液

实验步骤

实验试剂：

l. 饱和的熏蒸酚：市售AR经酚须在182度用空气冷凝管进行重蒸馏，冷却后加入8一羟基喹啉，使其浓度达到1g／L，向液体酚中加入等体0.5mlTris－HCL缓冲液（PH8.0），置磁力搅拌15min，抽取上层（水层）液体再加入等体积0.lmol／LTris－HCL缓冲液（pH8.0），同样搅拌15min，分相完全后吸取上层液体，最后向酚层（下层）加入1／10体积的含2g/L巯基二醇的0.1mol/LTris－HCL缓冲进（pH8.0），分装后避光20度保存，至少可用一个月，

2. 氧仿

3. 异戊醇

4. 氯仿／异戊醇混合液，比例为24：1或9：1

①8一羟基喹啉为黄色化合物，是一种抗氧化剂．又是酶的部分抑制剂和金属离子的弱结合剂．加入8一羟基喹啉使酚层呈黄色，又可作为识别的标记．

实验操作：

l. 样品加入等体积和酚或酚／氯仿（1：1）混合液．

2. 上下颠倒很匀．

3. 室温，12000转／分钟，离心5分钟．如蛋白质较多或分界不清时，可离心10分钟。

4. 吸取上层（水层）移置另一新的离心管中．

5. 加入等体积酚／氯仿／异戊酸（25：24：1）溶液．重复步骤2、 3、 4．

6. 加入等体积氯仿／异戊酸（24：1）溶液．重复步骤2、3、 4。

7. 乙醇沉淀核酸（见核酸的沉淀纯化）．