DNA的测序技术3

(二)：测序胶的制备

１：玻璃板的处理

Ａ，长板（不带凹槽、反硅化处理，粘胶板）

a,２N NaOH浸泡１小时以上，自来水冲洗，海绵或软布蘸洗涤剂将板清洗干净，自来水冲洗掉全部洗涤剂，无离子水中过三遍，晾干。b, 在1ml95%乙醇，0.5%冰乙酸中加入5μl粘合硅烷。c, 用b中所配溶液浸透薄棉纸，用此薄棉纸均匀擦拭玻璃板d，晾干后，用95%乙醇单向擦拭该板，然后略微用力沿垂直方向擦拭该板。重复３此这一乙醇擦拭过程。

Ｂ：短板（带凹槽、硅化处理，不粘胶板）

a,海绵或软布蘸洗涤剂将板清洗干净，自来水冲洗掉全部洗涤剂，无离子水中过三遍，晾干。b，用硅化液浸透的薄棉纸均匀擦拭该板。c，晾干后，用薄棉纸擦掉多余的硅化液。

２，按图将两块玻璃板及夹条安装好。

３，制胶 ６％的变性胶

Acr/Bis 19:1 ,

尿素 8M

Tris 90mM

硼酸 90mM

EDTA 2mM

TEMED(%) 0.05

抽气 ４℃保存

临用前按400μl/75ml预混液的比例加入过硫酸氨(100mg/ml)

４：灌胶

（三）：电泳

１，胶凝后，插入鲨鱼齿,

２，将Ⅰ中制备好的样品在90℃加热２分钟

３，加样，电泳，维持2000伏以上恒压（在加样前，同样电压预电泳），直至指示剂跑到胶下沿。

电极缓冲液为1×TBE。

（四）：银染

１，电泳结束后，橇开板，将附着胶的一块板置于固定/终止液中浸泡过夜或震荡3０分钟，直至指示染料消失。

２，凝胶洗涤，用超纯水震荡洗涤胶３次，每次２分钟，凝胶板从水中取出后，竖起控水１０－２０秒。