GPC凝胶色谱净化基本信息

　　凝胶色谱是以多孔凝胶为固定相，利用凝胶孔的空间尺寸效应，使不同大小的分子达到分离的一种高效液相色谱（HPLC）方法。其分离机理类似于分子筛效应，大体积分子只能渗入少量大孔，在固定相中所经历的路径较短，先流出。所有孔隙都不能进入的大体积分子，不被保留，在死体积处流出。因此，溶质按分子体积从大到小依次流出色谱柱。在凝胶色谱中，流动相只起溶解样品的作用，以有机溶剂为流动相的凝胶渗透色谱（GPC）应用较多，而以水为流动相的凝胶过滤色谱（GFC）的应用相对较少，这主要是因为水溶性大分子不仅可以溶于水，通常也能溶于有机溶剂中。四氢呋喃、氯仿、甲苯和二甲基甲酰胺等非极性有机溶剂是最常用的流动相。在凝胶色谱中，固定相表面与溶质分子间不存在化学相互作用，即固定相是惰性多孔材料。目前凝胶色谱固定相主要使用半硬质凝胶（如聚苯乙烯凝胶）和硬质凝胶（如多孔硅胶和多孔玻璃珠）。软质凝胶（如葡聚糖）因不耐压，通常只用于低压凝胶色谱。凝胶色谱主要用于高分子化合物的分子量及其分布的测定、中小分子有机物的分离与定量分析、生物大分子纯化（制备凝胶色谱）、凝胶色谱指纹图谱（如原油及其重质组分的评价）和样品净化。凝胶渗透色谱（GPC）用于样品净化的主要目的是为后续分析除去干扰物质（如大分子基体物质）或对样品进行浓缩。目前， GPC净化所用凝胶柱尺寸比用于GPC分析的要大。GPC样品净化采用的操作方式主要是为了分析生物样品中的小分子有机物而除去脂肪、蛋白质等大分子干扰物质；有时为了采用液质联用技术（HPLC-MS）等技术分析生物大分子，也可采用GPC除去样品中的小分子或脱盐。GPC除去大分子物质选择的固定相的孔径应该比较小，大分子难以进入孔道内，快速流出凝胶柱；而目标小分子可以进入孔道，在大分子物质之后流出，从而实现分离。