HPLC分类及其原理

HPLC分类有很多种，可以根据不同的依据进行分类。

1. 根据流动相和固定相的极性不同，HPLC可以分为正相色谱和反相色谱。

正相高效液相色谱： 色谱柱中的固定相是由硅胶、氧化铝等极性化合物组成。当色谱运行时，由于样品中的极性化合物对固定相有较强的亲和力，使它们在色谱柱中的保留时间比非极性化合物长，因此非极性化合物最先被洗脱出来。许多物质都可以用正相色谱法分析，但由于药物、食物和其他生物制品大都是非极性的，所以在日常生活中应用不如反向色谱法广泛。

反相高效液相色谱 ：固定相由非极性化合物组成，如十八烷基硅烷、C18、C8等有机化合物。流动相是极性的。因此，极性高的化合物最先被洗脱，低极性或无极性的化合物最后洗脱。

HPLC大都是对药物、食品、生化分子等物质进行分析，而它们在自然界中都是极性物质（水溶性）。因此，反相高效液相色谱应用更为广泛。

2. 根据分离原理的不同，HPLC可分为以下六种。

亲和色谱： 主要利用样品与固定性之间的亲和性，实现分离。

离子交换色谱： 基于固定相与流动相的带电基团发生可逆交换，达到分离目的。离子交换树脂用于分离含有带电离子的样品。对于阴离子，使用阴离子交换树脂；对于阳离子，使用阳离子交换树脂。主要用于分离酸性和碱性化合物。

离子对色谱： 在反相色谱的流动相或固定相中加入离子配对剂，与样品中可电离的成分形成“对离子”。常用的离子配对剂有戊烷、己烷、庚烷或辛烷磺酸盐等。

吸附色谱： 是利用吸附性不同的原理，根据样品中的组分对固定相的亲和力不同而发生分离。

空间排阻色谱： 按样品中的组分的分子大小顺序进行分离。色谱柱是由琼脂糖、葡聚糖、聚丙烯酰胺等软凝胶制成，也可用烷基葡聚糖、聚苯乙烯等半刚性凝胶。

手性色谱： 用于分离样品中的光学活性异构体。固定相采用化学键合硅胶。常应用于医药、生物等领域。

3. 根据分析目的不同，HPLC可以分为分析型液相色谱和制备型液相色谱。

分析型液相色谱： 主要利用检测器对混合物中各组分进行定性和定量分析。

制备型液相色谱： 主要是对混合物中各组分进行分离纯化。制备型的色谱柱和进样量都比分析型大。

4. 正如大家所知道的，混合物的分离是由于流动相流过HPLC色谱柱完成的，其中流动相可以是单一的溶剂，也可以是混合溶剂，因此HPLC可以分为等度洗脱和梯度洗脱两种类型。

等度洗脱： 只有一种溶剂，所有的操作都是在一种溶剂下进行的。

梯度洗脱： 流动相由两种或两种以上的溶剂组成，并不断改变其浓度配比。