HPLC法测定保健食品中芦荟的含量

1 范围

本标准规定了保健食品中芦荟苷的高效液相色谱测定方法。

本标准适用于以芦荟和加工产品为原料的保健食品中芦荟的含量测定。

2 原理

以甲醇和水（55+45）为溶剂，用高效液相色谱c18柱分离，在293nm波长下检测。芦荟苷的保留时间为定性，峰面积为定量。

3 试剂和材料

除另有说明外本方法所用试剂为分析纯净水水为GB/T 6682规定的一级水。

3.1 试剂

3.1.1甲醇（CH3OH）：色谱纯度。

3.1.2石油醚：沸程30℃～60℃。

3.2 标准品

芦荟苷标准品（C21H22O9）。

3.3 标准溶液的配制

3.3.1芦荟苷标准储备液：称取10.00 mg芦荟苷标准品于25 ml容量瓶中加流动相溶解定容至刻度摇匀。

3.3.2芦荟标准溶液：芦荟苷标准保留液分别以0.5mL、1.0mL、2.0mL、4.0mL、6.0mL至10 mL体积瓶吸收，浓度分别为20μ·mL、40μg·mL、80μg/mL、160μ/mL、240μg/mL。芦荟苷标准溶液浓度分别为20μ/mL、40μg/mL、80μg/mL、160μ/mL和240μg/mL。

4 仪器设备

4.1高效液相色谱仪：带有紫外探测器或二极管阵列检测器。

4.2 超声波清洗器。

4.3分析平衡：灵敏度1毫克，0.1毫克。

4.4离心机：转速（>3000 r/min）。

4.5微孔滤膜：0.45。米

5 分析步骤

5.1 试样制备

5.1.1 固体试样

称取1g样品（精确至0.001 g），并均匀混合。在塞锥瓶中加入50.0ml流动相。称取液体并用超声波处理10分钟。用流动相补偿失重，均匀摇动。滤液用0.45um微孔膜过滤，并对滤液进行测定必要时适当稀释。

5.1.2含油基质试样

称取试样1g（精确至0.001 g），向塞锥瓶中加入25.0ml石油醚。涡旋使油醚液体充分混合、过滤和废弃。用少量石油醚清洗锥形瓶和滤纸。将滤纸和残渣放入原塞锥瓶中，加入50.0ml流动相，称重，超声处理10分钟，冷却，填充流动相。失重后摇匀，用0.45um微孔膜过滤。要测量滤液。必要时适当稀释。

5.1.3 水性液体试样

必要时，上清液用流动相稀释离心。上清液经0.45微孔膜过滤。

5.2色谱参考条件

5.2.1色谱柱：C18柱，柱长度250mm，内径4.6mm，粒径5。mμm或等效性能。

5.2.2流动相：甲醇+水=55+45。

5.2.3流速：1 mL/min。

5.2.4柱温：40℃。

5.2.5检测波长：293 nm。

5.2.6进样量：10 μL。

5.3 标准曲线的制作

将标准系列溶液（3.3.2）注入高效液相色谱（hplc）中，测定相应的峰面积以标准工作液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

5.4 试样溶液的测定

将样品溶液(5.1.1，5.1.2，5.1.3)注入液相色谱仪，保留时间为定性，记录峰面积，根据标准曲线测定样品溶液(样品溶液高效液相色谱仪)中芦荟的浓度。

6 结果计算

试样中芦荟苷含量按式（1）计算：

Ci×V ×100

Xi = ..........................................（1）

m×1000

式中：

xi样品中芦荟苷的含量以g/100g或g/100ml为单位。

用标准曲线确定的CI_确定样品溶液中的芦荟浓度，单位为mg/mL；

用v测量的样品溶液的体积以毫升（ml）为单位。

(A)以克(G)或毫升(毫升)计的m样本的样本质量；

100——单位转换；

1000——单位转换。

计算结果用在重复条件下获得的两个独立测量值的算术平均值表示并保留三个有效数字。

7 精密度

在重复性条件下获得的两个独立结果绝对差值不超过算术平均值的10%。

8 其他

当样品重量为1g体积为50ml时芦荟苷的定量限为0.0046g/100g。