HPLC部分问题解答

1、除了流速外，还有哪些因素能引起压力改变?

改变流动相组成和温度;改变柱长、柱内径和填料粒度;柱突然阻塞压力升高(正常情况下其它条件不变柱压都是逐渐升高的)。

2、什么是强溶剂、弱溶剂?

改变流动相的组成或溶剂溶剂强度就可以改变峰容量因子和保留时间。在一定条件下，减少保留时间或缩短分析时间的溶剂为强溶剂，增加保留时间或延长分析时间的溶剂为弱溶剂。

3、怎样才会使峰位发生重排?

在分析多组分样品时，仅改变流动相的强度(组成百分比)而不改变其组成，一般仅仅改变所有组分的保留时间，不会发生峰位的重排。

下列条件改变可能发生峰位重排：

流动相中换了强溶剂;pH值的改变;柱填料的改变;柱温的改变;流动相的组成改变(如，加入离子对试剂三乙基胺等)。

4、除了在线脱气，常用的实验室脱气方式还有哪些?

加热回流脱气，脱气效果最佳，但无法保持;氦脱气，此方法脱气效果佳，能除去百分之九十以上的空气，但氦气价格太贵，所以用的不多;真空脱气，效果仅次于氦脱气，但脱气过程中容易造成样品溶液挥发损失;超声脱气，只能脱去约百分之三十的空气，但，在实验室中最常用。目前还是尽量争取用在线脱气，方便且效果好。

5、评价一个色谱柱的最基本指标有那些?

评介一根色谱柱的基本指标是：塔板数、峰不对称因子、柱压降、适用范围和键合相浓度以及峰容量。

6、什么是时间常数?

时间常数实际上是响应时间的设定，起着过滤噪音的作用。时间常数太小(太快)可能增加短噪音，时间常数太大(太慢)可能出宽峰、拖尾峰。

7、为什么在实验过程中有时会出现倒峰?

所用的流动相在检测波长下有吸收，而进在此波长下没有吸收或吸收低于流动相的溶液，在流动相中会出现洞穴，通过柱后出现倒峰。

8、什么是次级保留效应?

在良好的色谱分离中，样品分子是以单一的保留过程被保留，如在反相色谱中，溶质与柱填料的非极性烷基链发生疏水性相互作用，但，在以硅胶为基质的填料中，有些样品组分能与硅醇基团相互作用，脱附的过程很慢，使峰严重拖尾，这就是次保留过程。对付次保留效应最有效的方法就是选用封尾更好色谱柱或加入流动相改良剂(也叫扫尾剂)。

9、前延峰的发生及处理?

因柱温问题很易引起前延峰，有些样品在常温下分离可见前延峰，提高温度后前延峰的现象消失。在离子对色谱中，前延峰的另一个原因是用非流动相作样品溶剂。因此在离子对色谱中要求仅用流动相溶解样品，而且进样量不要太大，否则会导致前延峰或其它问题。在rp-HPLC中样品溶液的强度大于流动相引起前延峰。增加流动相的强度，减少样品溶液的强度，在离子对色谱中增加离子强度，可以克服前延峰的效应。此外使用流动相溶解样品是解决的最简单实用的方法。