LCM实验

RNaseAway

RNaseAway

胶带 LCM 棺子 去湿器 分液器 镊子 LCM 系统  Pix Cell Ⅱ 无 RNA 酶的管子

一、材料

1. 缓冲液、溶液和试剂

RNaseAway(7000，MolecularBioProducts，SanDiego，CA)

2. 特殊设备.

胶带

LCM 棺子（ArcturusEngineering〉

去湿器

分液器，P200,P2

镊子

LCM 系统

Pix Cell Ⅱ(ArcturusEngineering)

无 RNA 酶的管子，0.5 ml

二、方法

根据生产商操作指南，简述如下。

1. 放样品片子于 Pix Cell Ⅱ 设备的转台上。

2. 手动定位片子以定位转移区域。

3. 打开真空卡盘使片子吸住。

4. 把 LCM 帽子通过旋转放置臂放到片子上。

5. 旋转激光连锁开关，等待10s。

6. 按下激光按钮。

7. 先进行高倍放大调节焦点。

激光束应定位于视野的中央。通过显微镜的激光束肉眼不能看见，所以当激光束开始工作时应当通过显示屏来进行微分离。在组织区域外选择最小的点（7.5um) 进行测试脉冲以校正激光束的焦距。

8. 用操纵杆移去目标之外的其他组织和细胞。

LCM 之后，LCM 帽子应当立刻移走，并插入到无 RNA 酶的含有 RNA 提取溶液的0.5 ml 管中。

 LCM 的工作间应当干净、干燥、没有 RNA 酶。分液器、镊子以及其他设备应当用去 RNA 酶溶液洗过。如果湿度高，去湿器也是需要的。为了得到好的样本，PixCelin 的激光束必须能合适地聚焦。因为组织样品厚度的不同会影响激光的聚焦，所以应当使组织样品厚度均一。

1. 每一张切片使用LCM切取0.1cm2和0.3cm2的组织各两个重复，（不染色的切法：使用染色的切片作为对照切下相邻不染色的切片）。

2. 切下的组织片置于1.5mL离心管中，-80℃保存。

本实验来源于《 PCR 实验指南（第二版）》，作者：种康，瞿礼嘉。