LSCM样品制备中相关实验方法

样品制备中相关实验方法

用于免疫荧光抗体标记组织切片的载玻片需经过明胶、蛋白胶、多聚赖氨酸 ( Poly-L-Lysine)、硅烷(3-氨丙基三乙氧基硅烷，APES) 等处理，以粘贴组织切片，防止组织切片在免疫反应过程中脱落。简易明胶处理方法是将干净的载玻片浸于 0.1% 明胶热溶液中一分钟，取出沥干，65 ℃ 烘烤 1h，放至室温即可使用。0. 5% 明胶 - 硫酸铬钾处理方法是溶解4g 明胶和4g 硫酸铬钾于 800 mL d2H2O 中，65℃加热30 min 左右，使其溶解(不要使溶液沸腾)后，过滤溶液，并将溶液在室温下放置至 50 ℃ 左右，将玻片在溶液中浸提 3~4 次，在室温下过夜使其蒸发干，为防止灰尘，用保鲜膜覆盖，130 ℃ 烤干 3 h 以上，干燥保存备用。处理液使用后，可加入 0. 05% NaN3 ，4 ℃ 保存，下次处理载玻片时将溶液加热至50 ℃ 即可。大量处理过的载玻片，可以收集于载玻片盒中，放在干燥箱中长期保存。蛋白胶处理方法简便易行，多用于样品量不多的情况，取新鲜鸡蛋清充分搅拌，4 ℃ 过滤，清液加入等体积无荧光甘油，再加入 0. 05% NaN3 充分混合，分装成每管 1 mL，- 20℃ 保存，使用时室温融化，取少量蛋白胶均匀涂抹在干净的载玻片上，40℃烘干，放至室温即可使用。目前国内可以采购到明胶、多聚赖氨酸、硅烷等处理过的载玻片，大大节省了样品制备的准备时间。