NCIN87[N87]人胃癌细胞酵母双杂交实验常见问题

NCI-N87 [N87]人胃癌细胞 酵母双杂交实验常见问题

1.如果诱饵蛋白对酵母细胞是有毒的，该怎么办？ 

在某些情况下，在液体培养基中培养不好的菌珠可以在固体培养基上生长得很好。首先重悬克隆于1ml的SD/–Trp，接着将重悬液平铺于5 个100-mm的SD/–Trp平板，在30℃下温浴，直至平板上的克隆相互粘在一起。用5ml 0.5X YPDA刮下每块板上的克隆，并收集到一管中，这样就可以使用这个细胞重悬液进行正常的杂交反应。 

NCI-N87 [N87]人胃癌细胞 酵母双杂交实验常见问题2.如果诱饵蛋白能直接激活报告基因的表达，该如何处理？ 

该蛋白很可能有转录激活域，是个转录因子。可以通过基因重组切掉转录激活域，然后重新检测其是否自激活，但要注意重组也有可能破坏蛋白之间的互作。 

MNNG/HOS Cl #5 [R-1059-D]人骨肉瘤细胞

MOLT-4人急性淋巴母细胞白血病细胞

Mo-MuLV/3T3 小鼠Mo-MuLv感染的3T3细胞

MR1 [derivative of HB-11048]中国仓鼠X小鼠B淋巴细胞杂交瘤

MRC-5人胚肺细胞

MS1小鼠胰岛内皮细胞

MS751人子宫颈表皮癌细胞

MSTO-211H人肺癌细胞株

Mv.1.Lu（NBL-7）貂肺上皮细胞

NAMALWA人Burkitt's淋巴瘤细胞

NCI-H1299人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1395人肺腺癌细胞

NCI-H1650人非小细胞肺癌细胞

NCI-H1688  人经典小细胞肺癌细胞

NCI-H1975人肺腺癌细胞

NCI-H292人肺癌细胞（淋巴结转移）

NCI-H358人非小细胞肺癌细胞

NCI-H446 [H446]  人小细胞肺癌细胞

NCI-H460 [H460]人大细胞肺癌细胞

NCI-H661人大细胞肺癌细胞

NCI-H716 [H716]人结直肠腺癌细胞

NCI-N87 [N87]人胃癌细胞

NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L]小鼠成纤维细胞

Neuro-2a [N2a; Neuro-2a]小鼠脑神经瘤细胞

NG108-15 [108CC15] 小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞

NIH/3T3小鼠胚胎细胞

NIH:OVCAR-3  人卵巢癌细胞

NK-92MI 人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞,

NK-92  人恶性非霍奇金淋巴瘤患者的自然杀伤细胞,

NR8383大鼠肺泡巨噬细胞

NRK大鼠肾细胞

NCI-N87 [N87]人胃癌细胞 酵母双杂交实验常见问题3.转化效率太低怎么办？ 

可以采用以下方法解决： 

1） 检测一下DNA的纯度，如果可以的话，重新用乙醇纯化。 

2） DNA-BD/诱饵蛋白很可能是有毒的。 

3） 不适当的培养基，重新配制培养基，并做对照转化。 

4） 检测pGBT9对照载体的转化效率，放置于SD/–Trp平板上，转化效率应该在1 x 105 colonies/mg DNA以上。 

4.杂交效率不高，该如何处理？ 

在杂交中，预转化的诱饵细胞的数量可能不够。当对诱饵菌株进行液体培养时，应挑选大的、新鲜的克隆进行培养，经过离心和重悬后，再使用血球计对细胞进行计数。密度应该在1 x 109/ml。 

一个甚至两个融合蛋白对酵母细胞有毒。你可以通过重组方法来减轻毒性，同时又能保证蛋白的相互作用。或者使用表达水平较低的载体。也可以在琼脂平板或滤膜上进行杂交。但同时必须作杂交对照实验