Nature：CRISPR就是这么好用！让癌症免疫疗法“更有效”

　　短短几年的时间，革命性基因编辑技术CRISPR已经在多个不同领域展现了它的实力。现在，将其用于改善人类疾病治疗已成为很多人的期待。7月19日，一个美国科学家小组在Nature杂志发表了一项最新的研究成果。借助“魔剪”CRISPR，他们找到了能够让癌症免疫疗法更有效的新型药物靶点。

　　这篇题为“In vivo CRISPR screening identifies Ptpn2 as a cancer immunotherapy target”的论文描述了科学家借助CRISPR-Cas9开发了一种新的筛选方法，可用于检测小鼠中数以千计肿瘤基因的功能。利用这一筛选方法，研究小组找到了一个有望增强PD-1检查点抑制剂（癌症免疫疗法的关键成员）有效性的新药物靶点——Ptpn2。

　　删除肿瘤细胞上的Ptpn2基因能够使它们对PD-1检查点抑制剂更敏感。这一研究的通讯作者、儿科肿瘤学家W. Nick Haining博士说：“PD-1检查点抑制剂已经改变了多种癌症的治疗。然而，尽管这类癌症免疫疗法取得了临床上的成功，但大多数患者并没有获益于PD-1阻断疗法。”

　　W. Nicholas Haining（图片来源：Dana-Farber/Boston Children’s Cancer and Blood Disorders Center）

　　这一现状促使很多团队开始调查，是否能够通过将其它药物与PD-1抑制剂相联合，以增加能够响应这类疗法的患者数量。Haining博士说：“目前，我们面临的挑战是，找到最有效的用于联合治疗的靶点。因此，我们着手开发能够用于识别新药靶（有助于机体免疫系统对抗癌症的靶点）的更好的系统。”

　　基于“魔剪”CRISPR筛选数千个潜在靶点

　　研究中，论文第一作者Robert T. Manguso设计了一种基因筛选系统，用以鉴定被癌细胞用来躲避免疫攻击的基因。他利用CRISPR-Cas9系统地敲除了由黑色素瘤皮肤癌细胞所表达的2,368个基因。这使得Manguso能够鉴定出，当哪些基因被删除后，癌细胞对PD-1阻断疗法更加敏感。

　　那么实验是如何进行的呢？首先，研究人员工程改造了黑色素瘤皮肤癌细胞，使它们都携带Cas9酶（CRISPR编辑系统的一部分）；然后，利用一种病毒作为递送载体，他们给每个细胞递送了不同的“single guide RNA”（sgRNA）。联合Cas9酶，sgRNA能够使2,368个不同的基因被消除。

　　通过将肿瘤细胞注射到小鼠体内，然后用PD-1检查点抑制剂治疗这些小鼠，研究人员能够记录下哪些“修改后”的肿瘤细胞存活了下来。而那些死去的细胞由于它们失去了一些重要基因对PD-1阻断疗法变得敏感。

　　利用这一筛选途径，科学家们首先证实了两个已知的帮助癌细胞实现免疫逃逸的基因：PD-L1 和CD47。目前，FDA已经批准了3个PD-L1抗体上市。一些关于CD47抗体的临床试验已经在进行中。

　　随后，研究人员发现了多种新的免疫逃逸基因，如果抑制它们，能够增强PD-1免疫疗法的疗效。其中，Ptpn2是让研究者们特别感兴趣的一个。据Haining博士介绍，删除Ptpn2会增强免疫信号通路，从而使肿瘤生长缓慢，在免疫攻击下更容易死亡。