NatureChemicalBiology丨张潇雨团队开发新的CRISPR激活筛选方法

　　西北大学张潇雨团队在Nature Chemical Biology杂志上发表的题为：A CRISPR activation screen identifies FBXO22 supporting targeted protein degradation的研究为解决这一问题提供了新的思路。研究中，他们开发了一种CRISPR激活筛选方法，通过激活表达目标E3连接酶，成功绕过了内源性表达水平低的限制。

　　研究人员工程化HEK293T细胞，将FKBP12-EGFP融合蛋白引入作为模型底物，采用第二代CRISPR-Cas9转录激活系统，并设计了针对680种人类E3连接酶的定制sgRNA库。在一个以FKBP12为靶向的PROTAC（22-SLF）的作用下，他们成功筛选出了FBXO22作为支持降解的新型E3连接酶。通过过表达FBXO22的验证，确认了22-SLF介导的FKBP12降解过程，并进一步揭示了其依赖于FKBP12、22-SLF和FBXO22之间的三元复合物形成。22-SLF含有一个电亲性氯乙酰胺基团，进一步的突变研究表明，FBXO22上的C227和C228对于22-SLF的结合和降解FKBP12至关重要。

　　此外，研究团队还探讨了22-SLF的电亲性部分是否可以作为FBXO22招募配体，引导除FKBP12外其他蛋白质的降解。结果显示，通过将电亲性部分与JQ1（BRD4结合剂）或TAE（ALK抑制剂）连接，可以实现对BRD4或EML4-ALK融合蛋白的有效降解。通过基因敲除实验证实，这些PROTAC的降解活性依赖于FBXO22，表明22-SLF的电亲性部分可能普遍适用于将FBXO22引导至新的底物并将其降解。

　　综上所述，FBXO22作为一种E3泛素连接酶，展现了在PROTAC开发中的重要潜力。此外，本研究突显了CRISPR激活筛选在TPD研究中的实用性。考虑到FBXO22在肿瘤中相对于正常组织的高表达，这为降解癌症靶标提供了一条有前景的途径，可能有助于降低对正常细胞的毒性。