引物设计主要是要注意以下几个事项：
（1）发夹结构；
（2）反向配对；
（3）GC含量（40－60%）；
（4）退火温度（45－65度）；
（5）引物长度（18－27bp）；
（6）3' 端最好是C、G（提高结合度）；
（7）引物在序列中的错配位点。
大致就这几个方面，重要性依次降低，由其是3' 端绝对不能形成发夹结构。那么你说你这段能不能设计引物呢？其实设计引物都只是好中选优的问题。
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