PCR技术的原理与方法

PCR定义
PCR（Polymerase Chain Reaction）即聚合酶链式反应，是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。是一项DNA体外合成放大技术，能快速特异地在体外扩增任何目的DNA。可用于基因分离克隆，序列分析，基因表达调控，基因多态性研究等许多方面。

PCR技术的基本原理
一.pcr反应成分：
1.模板DNA；2.引物；3.四种脱氧核糖核苷酸；
4.dna聚合酶；5.反应缓冲液、Mg2+等。
二.PCR反应基本步骤：
1.变性：高温使双链DNA解离形成单链（94℃，30s）。
2.退火：低温下，引物与模板DNA互补区结合（55℃，30s）。
3.延伸：中温延伸。DNA聚合酶催化以引物为起始点的DNA链延伸反应（70～72℃，30～60s）
PCR技术的原理与方法
1.变性(denaturation)：通过加热使模板DNA的双链之间的氢键断裂，双链分开而成单链的过程。 
2.退火(annealling)：当温度降低时，引物与模板DNA中互补区域结合成杂交分子。 
3.延伸(extension)：在DNA聚合酶、dNTPs、 Mg2+存在下，DNA聚合酶催化引物按5’→3’方向延伸，合成出与模板DNA链互补的DNA子链。 
以上述三个步骤为一个循环，每一循环的产物均可作为下一个循环的模板，经过n次循环后，目的DNA以2n的形式增加。 
PCR技术的原理与方法