Promega推出ADCC检测新工具

　　抗体依赖性细胞介导的细胞毒性作用( ADCC )是抗体作用的一种机制， 病毒感染的细胞或其他病变细胞通过该机制被识别进而被细胞介导的免疫系统组分杀伤。Promega公司推出的ADCC Reporter Bioassay (ADCC 报告基因生物活性检测试剂盒 ) 应用生物发光法，通过测量 NFAT 信号通路的活化，定量检测治疗性抗体 Fc 效应因子功能(图 1 )。

　　图1. ADCC bioassay 示意图

　　试剂盒中包含“复苏 - 即用”的效应细胞(以冻存形式提供)和检测试剂。经过优化的操作方法使该检测具有变异性低、准确度高的特点，并且，该生物活性检测的全部操作可在一天内完成。这些特性使得 ADCC 报告基因检测试剂盒适用于抗体药物的研究，开发和产品的批签发检测( lot release )。试剂盒提供的“复苏 - 即用”细胞在严格的质控下生产，可有效减少多次重复实验间的变异性，并省去每次实验前扩增和准备细胞的步骤。

　　ADCC 是利用抗体介导药物杀伤靶癌细胞的理想机制。抗体与细胞表面上的目标抗原结合。如果抗体的 Fc 段同时结合到效应细胞(主要为自然杀伤细胞， natural killer cells )表面的 Fc γ RIIIa 受体上，两种类型的细胞即发生多重交联，导致 ADCC 作用机制通路的激活。 靶细胞的杀伤是此活化途径的终点，这一指标被用在经典的 ADCC 生物活性检测中，这些经典的检测方法利用供者的外周血单核细胞( PBMC )或自然杀伤( NK )细胞亚群作为效应细胞。这些细胞的应答变异性很大，难于制备，并容易引起很高的背景读数。

　　ADCC Reporter Bioassay 选择了 ADCC 作用机制通路激活过程中较早的事件作为检测的读出指标：即效应细胞中由 NFAT (活化 T 细胞核因子)通路介导的基因转录的激活。此外， ADCC 报告基因检测试剂盒使用工程改造的 Jurkat 细胞作为效应细胞，该细胞稳定表达了 Fc γ RIIIa 受体( V158 高亲和力突变体)和由 NFAT 应答元件驱动表达的萤火虫萤光素酶。 抗体在 ADCC 作用机制中的生物活性通过 NFAT 通路活化产生的萤光素酶定量，而效应细胞中的萤光素酶活性通过生物发光读数定量。检测的信号值高，且背景很低。

　　ADCC Reporter Bioassay 具有生物活性检测所必需的明确的特异性。只有同时具备带有正确表面抗原的靶细胞、正确的特异性抗体及表达 FcγRIIIa 的效应细胞时才会获得良好的检测应答，其中任一缺失都不能产生应答。

　　特点：

　　均质检测，简单方便：减少实验组间变异性。

　　提供“复苏 - 即用”形式的冻存细胞：无需繁琐的细胞扩增培养操作。

　　生物发光法：灵敏，信噪比高。

　　基于 ADCC 作用机制研发：与已有 ADCC 细胞毒性检测相关，并可替代已有检测。

　　灵活：可调整至 384 孔板模式。

　　已使用 FDA- 批准的抗体进行验证。

　　适用于药品批签发的质量控制：指示稳定性，卓越的线性度、准确度和精度。

　　应用：

　　• 验证 ADCC 作用机制(或缺少该机制)。

　　• 辨别糖基化和 afucosylation 水平。

　　• 批签发质量控制检测 (QC lot release bioassay) 。

　　• 抗体筛选。