RNA标记是将标记物(如放射性同位素、荧光素或酶)共价地连接到RNA,通过检测标记物,进而实现对RNA鉴别和检测的目的。RNA标记在分子探针领域应用广泛,在疾病诊断方面也很有前景。
理想的RNA标记方法应符合以下要求:
1. 操作简单,灵敏度高
2. 不影响碱基配对的特异性
3. 不影响RNA活性
4. 对酶促反应活性无影响或影响不大
5. 检测方法具有高度灵敏性和高度特异性
6. 标记物对人体无害
RNA标记方法:
按反应机制分如下四类:直接标记法,加尾标记法,基于逆转录反应的标记方法,基于RNA克隆扩增的标记方法。
常用于RNA标记的方法按标记物性质分为:
放射性同位素标记:32P、35S、3H
非放射性标记:半抗原荧光素化学发光物质
地高辛
地高辛标记RNA常用的方法是将DIG与UTP共价结合形成DIG-UTP,以DIG-UTP、ATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶T7、SP6经体外转录合成标记RNA。此法多用于RNA探针的制备,一般每20~25个核苷酸可引入一个地高辛分子。5'末端标记法5'末端标记法是通过化学方法将地高辛标记于寡核苷酸的5'末端。首先在5'末端连接上一个氨基连接臂残基,将合成的寡核苷酸纯化后,再使DIG-NHS与5'末端的氨基残基发生共价结合,从而形成标记RNA。DIG-RNA5'3'5'3'DIGAnti-DIG-APAP-DIG-RNA5'3'5'3'X光片曝光化学发光信号蓝紫色
生物素
用生物素标记RNA的方法常见的是用生物素与UTP结合形成Biotin-UTP,以Biotin-UTPATP、CTP、GTP为底物通过RNA聚合酶SP6、T7等经体外转录合成标记RNA。
荧光素
目前常见的荧光染料包括:异硫氰酸荧光素(FITC)四甲基异硫氰酸罗丹明四乙基罗丹明得克萨斯红藻红蛋白(PE)花青类染料(Cy3、Cy5)新型荧光素如量子点(半导体纳米晶体)。
点击化学
点击化学(Clickchemistry)是2001年诺贝尔化学奖获得者美国化学家Sharpless提出的一种快速合成大量化合物的新方法。该技术在诸多领域尤其是生物偶联技术和生物医药方面有广泛应用前景。
2024年4月18日-20日,由中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会举办的“中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会2024学术峰会”在湖北襄阳盛大召开。本届学术峰会以“精准诊断、维护健康”为主题,邀......
——中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会2024学术峰会开幕2024年4月18日-20日,由中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会举办的“中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会2024学术峰会”在湖......
2024年4月18日,在这个春意盎然的季节,中国分析测试协会标记免疫分析专业委员会2024年学术峰会在湖北襄阳隆重召开。来自全国各地的体外诊断行业精英齐聚一堂,共同关注“精准诊断、维护健康”这一主题,......
RNA编辑技术通过改变RNA序列来“补偿”有害的突变,使正常蛋白得以合成。RNA编辑也可增加有益蛋白的产生。与CRISPR基因组编辑不同,RNA编辑不会改变基因,也不会产生永久性的变化。图片来源:视觉......
植物是复杂的生物系统。植物体内基因的表达受到多种水平的调控,如转录水平、转录后水平、DNA甲基化/去甲基化等,从而对基因表达进行精密高效的调控。中国科学院遗传与发育生物学研究所张劲松研究组筛选OsEI......
博德研究所张锋团队在PNAS 在线发表题为“HumanparaneoplasticantigenMa2(PNMA2)formsicosahedralcapsidsthatcanbeengin......
今年1月9日,我国继美国、日本之后,正式批准治疗阿尔茨海默病的新药仑卡奈单抗上市。这款药曾被美国《科学》杂志列为2023年度十大科学突破之一。如何攻克阿尔茨海默病一直是医学界的重要课题。据世界卫生组织......
——天津市标准物质与稳定同位素标记技术研究重点实验室扩建剪彩及标准物质技术研讨会成功举办2024年1月16日,天津市标准物质与稳定同位素标记技术研究重点实验室(以下简称重点实验室)扩建剪彩及标准物质技......
日,《科学通报》在线发表了华南农业大学园艺学院教授夏瑞团队最新研究成果,他们研究开发出一款多功能植物小RNA分析工具——sRNAminer,可便于研究人员进行一站式小RNA分析及可视化。据介绍,植物小......
RNA干扰是指由双链RNA诱导的基因沉默现象,在细胞发育和抗病毒免疫等生物学过程中发挥重要作用,并被用作基因功能研究和疾病治疗的遗传工具。RNA干扰现象可在秀丽隐杆线虫全身及其后代中传播,被称为系统性......