SDSPAGE凝胶制实验及其各实验试剂的配制方法

SDS-PAGE凝胶制备属于实验室最常规的操作了，刚开始做蛋白实验总是在找凝胶配制实验中所用试剂的配方，这里总结了分离胶、浓缩胶、分离胶和浓缩胶缓冲液、考马斯亮蓝染液、样品缓冲液、电泳缓冲液等配方。
1.
分离胶(12%)
配制

所需试剂

所需体积

分离胶(12％)

30％丙烯酰胺

6.0
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

3.8
ml

10%SDS

150
μl

10%过硫酸铵

150
μl

TEMED

6
μl

蒸馏水

4.9
ml

2.
浓缩胶(5%)
配制

所需试剂

所需体积

浓缩胶(5％)

30％丙烯酰胺

1.3
ml

1.5
mol/l
Tris-HCl

1.0
ml

10%SDS

80
μl

10%过硫酸铵

80
μl

TEMED

8
μl

蒸馏水

5.5
ml

3.
分离胶缓冲液(pH8.9)
配制

所需试剂

所需体积

分离胶缓冲液

Tris

36.6
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸馏水

补足至100
ml

4.
浓缩胶缓冲液(pH6.7)
配制

所需试剂

所需体积

浓缩胶缓冲液（pH6.7）

Tris

5.98
g

1
mol/l
HCl

48
ml

蒸馏水

补足至100
ml

5.
30%丙烯酰胺(pH≤7.0)
配制

所需试剂

所需体积

30%丙烯酰胺（pH≤7.0）

丙烯酰胺

29
g

甲叉-双丙烯酰胺

1
g

蒸馏水

补足至100
ml

6.
10%过硫酸铵(W/V)：1g过硫酸铵溶于10ml水中，4℃保存数周，尽量现用现配。
7.
10%SDS：将10
g
SDS溶于80ml重蒸水中并轻缓搅拌(室温低时需水浴加热溶解)，再定容至100ml，室温存放。
8.
样品缓冲液
配制

所需试剂

所需体积

样品缓冲液

1
M
Tris-HCl（pH6.7）

5
ml

SDS

2.5
g

巯基乙醇

1
ml

溴酚兰

0.05
g

蔗糖

10
g

蒸馏水

补足至100ml

9.
考马斯亮蓝染色液：0.25g考马斯亮蓝R-250用少量甲醇溶解后，用甲醇(40ml)-乙酸(10ml)水溶液稀释至100ml。
10.
Tris-甘氨酸电泳缓冲液(pH8.3)
配制

所需试剂

所需体积

Tris-甘氨酸
电泳缓冲液（pH8.3）

Tris碱

15.1
g

甘氨酸

94
g

10％（W/V）SDS

50
ml

去离子水

补足至100
ml

凝胶配制所需试剂的母液不能放置太久，有条件的实验室可将母液保存在4度冰箱中，放置母液被微生物污染或者出现沉淀。