Waters色谱柱开启和安装的步骤

色谱柱开启和安装的推荐步骤：

使用新鲜洁净的水与乙腈。冲洗系统，确保系统干净，不含任何缓冲盐和污染物。

取用色谱柱时避免磕碰掉落。

将色谱柱入口端连接到系统上，柱出口端先不要连接，色谱柱身上有箭头标明正确流向。

在0.1 mL/min流速条件下用纯乙腈润洗色谱柱，然后在2分钟内将流速升至0.5 mL/min。

当溶剂均匀的从柱出口端流出，停流速，将色谱柱出口端接到系统检测器上（这样可以避免气泡进入检测系统，并且可快速达到基线平衡）。

重启流速，按照步骤4的方法逐渐提高流速，至常规分析时所使用的流速。

参考柱效测试报告中的方法，使用该流动相条件平衡色谱柱，通常需要使用5-10倍柱体积的流动相，直至压力与基线稳定。

测试柱效。如果没有柱效测试报告中的分析物，请联系沃特世化学消耗品部门寻求支持，使用合适的浓度与进样量。柱效结果略低于柱效测试报告属正常情况。如结果明显偏低、峰形拖尾，提示色谱柱和/或所使用的液相系统处于非理想状态，需要进行故障排查。

当使用2.1 mm内径色谱柱时，建议优化系统以减少谱带展宽，包括：使用检测器微量流通池，减少进样器loop环体积，使用较小内径（如0.005''或0.12 mm）的系统管路。并确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积。

当使用小颗粒填料（如2.5 um）短柱进行高效快速分离时，需要考虑以下因素：

确保管路与色谱柱连接恰当、无死体积，尽量优化系统减少谱带展宽；

提高采样频率至10点/秒以上；

较小粒径的色谱柱产生的柱压较高，而较小粒径要达到最优色谱效率所需的线速度较高，请根据所用LC系统的实际情况调节流速；

可使用较高的柱温来补偿小颗粒造成的压力升高，例如40°C。使用杂化颗粒反相色谱柱时，可使用45°C或更高。