BAL31核酸酶消化法产生双向缺失突变体实验

本方案使用核酸酶 BAL31(从海洋细菌 Alteromonas espejiana BAL31 中纯化)在克隆的 DNA 片段中产生单向或双向缺失。BAL31 是一个复合酶,它以非同步的方式消化双链靶 DNA。因此与诸如外切核酸酶Ⅲ这类的加工酶相比,BAL31 产生的缺失更具有不均一性(请见方案 9)。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒BAL31 缓冲液EGTA乙醇酚氯仿醋酸钠蔗糖凝胶上样缓冲液TE噬菌体 T4DNA 聚合酶BAL31 核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段限制性内切酶琼脂糖凝胶用于凝胶电泳的 DNA 分子量标准仪器、耗材计时钟水浴实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液,缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1, 将贮存液稀释到合适的浓度。5XBAL31 缓冲液2.5mol/LNaCl62.5 mmol/LCaCl262.5 mmol/LMgC......阅读全文

外切核酸酶的基本介绍

一、核酸外切酶有些核酸酶能从DNA或RNA链的一端逐个水解下单核苷酸,所以称为核酸外切酶。只作用于DNA的核酸外切酶称为脱氧核糖核酸外切酶,只作用于RNA的核酸外切酶称为核糖核酸外切酶;也有一些核酸外切酶可以作用于DNA或RNA。核酸外切酶从3′端开始逐个水解核苷酸,称为3′→5′外切酶,例如,蛇毒

外切核酸酶的基本介绍

  核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶(RNase),有些核酸酶只能作用于DNA,称为脱氧核糖核酸酶(DNase),有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA

内切核酸酶的基本信息

中文名称内切核酸酶英文名称endonuclease定  义从核酸分子内部切割磷酸二酯键而生成DNA片段的酶。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

切除核酸酶的基本信息

中文名称切除核酸酶英文名称excision nuclease定  义一种参与核酸切除修复的酶,在损伤的核酸片段附近与DNA结合并将损伤片段予以切除。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

内切核酸酶的基本信息

中文名称内切核酸酶英文名称endonuclease定  义从核酸分子内部切割磷酸二酯键而生成DNA片段的酶。应用学科遗传学(一级学科),分子遗传学(二级学科)

切除核酸酶的基本信息

中文名称切除核酸酶英文名称excision nuclease定  义一种参与核酸切除修复的酶,在损伤的核酸片段附近与DNA结合并将损伤片段予以切除。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

核糖核酸酶A的用途说明

生化研究,测定核酸的结构· RNase 保护检测· 去除非特异结合的RNA· 分析RNA 序列· 水解蛋白样品中的RNA· 纯化DNA此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除

核酸酶的生物学意义

凡是能水解核酸的酶都称为核酸酶.凡能从多核苷酸链的末端开始水解核酸的酶称为核酸外切酶,凡能从多核苷酸链中间开始水解核酸的酶称为核酸内切酶.能识别特定的核苷酸顺序,并从特定位点水解核酸的内切酶称为限制性核酸内切酶。

核糖核酸酶H的定义

所有类型细胞均含有不止一种核糖核酸酶H。核糖核酸酶H(RNaseH)催化DNA-RNA杂合体的RNA部分的核内降解,产生不同链长带3'羟基和5'磷酸末端的寡核糖核酸。

S1核酸酶的作用

S1核酸酶的单链水解功能可以作用于双链核酸分子的单链区,并从单链部位切断核酸分子,而且这种单链区可以小到只有一个碱基对的程度。由于具备这种功能,使S1核酸酶在分析核酸杂交分子(RNA-DNA)的结构、给RNA分子定位、测定真核基因中间隔子序列的位置、去除DNA片段中突出的单链尾,以及打开在双链cDN

外切核酸酶Ⅲ的基本信息

中文名称外切核酸酶Ⅲ英文名称exonuclease Ⅲ;exoⅢ定  义编号:EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脱氧核糖核酸外切,产生5′-磷酸单核苷酸的酶。此酶优先水解双链DNA,对DNA链上无嘌呤核苷酸附近的位点具有核酸内切酶的活性。大肠杆菌外切脱氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一种。应用学科生物

外切核酸酶的基本信息

核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶(RNase),有些核酸酶只能作用于DNA,称为脱氧核糖核酸酶(DNase),有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA也能

关于外切核酸酶的种类介绍

  20世纪70年代,在细菌中陆续发现了一类核酸内切酶,能专一性地识别并水解双链DNA上的特异核苷酸顺序,称为限制性核酸内切酶(restrictionendonuclease,简称限制酶)。当外源DNA侵入细菌后,限制性内切酶可将其水解切成片段,从而限制了外源DNA在细菌细胞内的表达,而细菌本身的D

兆核酸酶的基本信息

中文名称兆核酸酶英文名称meganuclease定  义一类核酸酶内切酶,其识别序列较长,位点极为罕见,切割产生的片段很大,是定位基因操作的工具。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)

S1核酸酶的简介

  对双链DNA、双链RNA和DNA-RNA杂交体相对不敏感。通常水解单链DNA的速率要比水解双链DNA快75000倍。这种酶需要低水平的Zn2+的激活,最适pH范围为4.0~4.3。一些螯合剂(如EDTA和柠檬酸等)能强烈地抑制S1核酸酶活性,此外磷酸缓冲液和0.6%左右的SDS溶液也可以抑制它的

S1核酸酶的作用

  S1核酸酶的单链水解功能可以作用于双链核酸分子的单链区,并从单链部位切断核酸分子,而且这种单链区可以小到只有一个碱基对的程度。由于具备这种功能,使S1核酸酶在分析核酸杂交分子(RNA-DNA)的结构、给RNA分子定位、测定真核基因中间隔子序列的位置、去除DNA片段中突出的单链尾,以及打开在双链c

核糖核酸酶的用途说明

生化研究,测定核酸的结构· RNase 保护检测· 去除非特异结合的RNA· 分析RNA 序列· 水解蛋白样品中的RNA· 纯化DNA此外,它具有显著的细胞毒性,可以杀灭许多肿瘤细胞系,可以抑制导致艾滋病的HIV-1病毒在细胞中的复制,可以治疗乙肝。(1)从DNA-RNA或RNA—RNA杂合体中去除

外切核酸酶的基本信息

核酸分解的第一步是水解核苷酸之间的磷酸二酯键,在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的核酸酶。不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称为核糖核酸酶(RNase),有些核酸酶只能作用于DNA,称为脱氧核糖核酸酶(DNase),有些核酸酶专一性较低,既能作用于RNA也能

核糖核酸酶的基本介绍

  去氧核糖核酸酶在高等动物的胰液中发现。核苷酶,发现存在于高等动物的肠液中。  人体的消化功能依靠胃肠运动的机械性消化和消化酶作用的化学性消化来完成。消化液中含有大量消化酶,可促进食物中糖、脂肪、蛋白质的水解。由大分子物质变为小分子物质,以便被人体吸收利用。葡萄糖、甘油、甘油-酯、氨基酸等都是可溶

核糖核酸酶(胰腺)的测定

实验方法原理 RNaseⅠ分解 RNA 形成 3'-磷酸单核苷酸和 3'-磷酸多核苷酸,以 Cp 或 Up 结尾形成一个 2',3'-环状磷酸中间体。实验材料 酶样品试剂、试剂盒 乙酸缓冲液乙酸铀酰-高氯溶液RNA(酵母)溶液核酸核酸酶仪器、耗材 分光光度计实验步骤

核酸酶的基本信息介绍

  能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶,称为核酸酶。核酸酶属于水解酶,作用于磷酸二酯键的P-O位置。  核酸酶是在核酸分解的第一步中,作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种核酸。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。  不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称

外切核酸酶Ⅲ的基本信息

中文名称外切核酸酶Ⅲ英文名称exonuclease Ⅲ;exoⅢ定  义编号:EC 3.1.11.2。沿3′→5′方向催化脱氧核糖核酸外切,产生5′-磷酸单核苷酸的酶。此酶优先水解双链DNA,对DNA链上无嘌呤核苷酸附近的位点具有核酸内切酶的活性。大肠杆菌外切脱氧核糖核酸酶Ⅲ是其中一种。应用学科生物

核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记RNA探针)

            实验方法原理 核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。

核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针...

核糖核酸酶保护(用核糖核酸酶和放射性标记的RNA探针对RNA作图)实验方法原理 核糖核酸酶保护分析用于度量特异性 mRNA 的丰度以及为它们的拓扑异构特征作图。这种方法包括测试 RNA 与互补的放射标记的 RNA 探针(核糖探针)杂交,然后未杂交的序列被一种或几种单链特异性的核糖核酸酶裂解。实验材料

核糖核酸酶的基本信息

指能水解RNA磷酸二酯键的酶称核糖核酸酶(ribonuclease,RNase)。不同的RNase其专一性不同,例如牛胰核糖核酸酶(RNase I),它的作用位点是嘧啶核苷3’一磷酸与其他核苷酸之间的连接键,而核糖核酸酶T1(RNase T1)的作用位点是3’鸟苷酸与其他相邻核酸之间的5’一OH间的

关于核酸酶的基本信息介绍

  能够将聚核苷酸链的磷酸二酯键切断的酶,称为核酸酶。核酸酶属于水解酶,作用于磷酸二酯键的P-O位置。  核酸酶是在核酸分解的第一步中,作用于水解核苷酸之间的磷酸二酯键的一种核酸。在高等动植物中都有作用于磷酸二酯键的。  不同来源的核酸酶,其专一性、作用方式都有所不同。有些核酸酶只能作用于RNA,称

核糖核酸酶A的基本信息

核糖核酸酶A是内切核糖核酸酶,可特异地攻击RNA上嘧啶残基的3'端,切割与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键。反应终产物是嘧啶3'磷酸及末端带嘧啶3'磷酸的寡核苷酸。无辅因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可被胎盘RNA酶抑制剂(B1ackburn et al.1977)或氧钒

核糖核酸酶的理化性质

核糖核酸酶,白色粉末。为具有球蛋白性状的一种蛋白质。溶于水、50%丙酮。此酶最适宜温度为60℃,85℃以上失去作用,最适宜的pH值为7.6。是催化核糖核酸水解的一种核酸内切酶,可使胞嘧啶核酸解聚。对胸腺核酸则无作用。用于生化研究。

核糖核酸酶的理化性质

核糖核酸酶,白色粉末。为具有球蛋白性状的一种蛋白质。溶于水、50%丙酮。此酶最适宜温度为60℃,85℃以上失去作用,最适宜的pH值为7.6。是催化核糖核酸水解的一种核酸内切酶,可使胞嘧啶核酸解聚。对胸腺核酸则无作用。用于生化研究。