BAL31核酸酶消化法产生双向缺失突变体实验
本方案使用核酸酶 BAL31(从海洋细菌 Alteromonas espejiana BAL31 中纯化)在克隆的 DNA 片段中产生单向或双向缺失。BAL31 是一个复合酶,它以非同步的方式消化双链靶 DNA。因此与诸如外切核酸酶Ⅲ这类的加工酶相比,BAL31 产生的缺失更具有不均一性(请见方案 9)。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W. 拉塞尔。试剂、试剂盒BAL31 缓冲液EGTA乙醇酚氯仿醋酸钠蔗糖凝胶上样缓冲液TE噬菌体 T4DNA 聚合酶BAL31 核酸酶大肠杆菌 DNA 聚合酶 IKlenow 片段限制性内切酶琼脂糖凝胶用于凝胶电泳的 DNA 分子量标准仪器、耗材计时钟水浴实验步骤材料缓冲液和溶液贮存液,缓冲液和试剂的成分请参阅附录 1, 将贮存液稀释到合适的浓度。5XBAL31 缓冲液2.5mol/LNaCl62.5 mmol/LCaCl262.5 mmol/LMgC......阅读全文
核糖核酸酶T1的用途
用途:去除DNA-RNA杂交体中未杂交的RNA区。
金葡菌核酸酶的基本信息
中文名称金葡菌核酸酶英文名称staphylococcal nuclease定 义编号:EC 3.1.31.1。一种存在于金黄色葡萄球菌﹑依赖Ca2+离子的酶,可将DNA或RNA水解成单核苷酸或双核苷酸。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
内切核糖核酸酶的基本信息
中文名称内切核糖核酸酶英文名称endoribonuclease定 义催化核糖核酸内部磷酸二酯键水解的酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
金葡菌核酸酶的基本信息
中文名称金葡菌核酸酶英文名称staphylococcal nuclease定 义编号:EC 3.1.31.1。一种存在于金黄色葡萄球菌﹑依赖Ca2+离子的酶,可将DNA或RNA水解成单核苷酸或双核苷酸。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
内切核糖核酸酶的基本信息
中文名称内切核糖核酸酶英文名称endoribonuclease定 义催化核糖核酸内部磷酸二酯键水解的酶。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
微球菌核酸酶的基本信息
微球菌核酸酶(Micrococcal Nuclease) 是只降解核小体连接区DNA的核酸酶,由于核小体处的DNA被组蛋白1保护而不被降解。
关于核糖核酸酶P的基本介绍
核糖核酸酶 P 是一种核糖核蛋白, 含有一个单链RNA分子, 长度为375个碱基, 结合一个相对分子质量为20kDa的多肽(119个氨基酸残基)。RNA具有催化切割tRNA的能力,蛋白质则起间接的作用,可能是维持RNA结构的稳定。该酶广泛存在于原核生物和真核生物(核仁、叶绿体和线粒体)中,也参与
用S1核酸酶对RNA作图
实验方法原理 三种不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行 RNA 定量,确定内含子位置,以及用来鉴定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5' 端和 3' 端的位置。当检测 RNA 被杂交到
核酶和核酸酶是不是一样
核酸酶是水解核酸的酶,核糖核酸酶是催化RNA水解的酶,脱氧核糖核酸酶就是催化DNA水解的酶,这就和蛋白酶是催化蛋白质水解的酶、脂肪酶是催化脂肪水解的酶以及淀粉酶是催化淀粉水解的酶是一个道理。核酶不是酶,核酶不是酶,核酶不是酶。酶(Enzyme)的化学本质是蛋白质。RNA为主要成分,有催化活性的叫做核
用S1核酸酶对RNA作图
实验方法原理 三种不同的核酸酶——S1 核酸酶、RNA 酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行 RNA 定量,确定内含子位置,以及用来鉴定在克隆的 DNA 模板上的 mRNA 的 5' 端和 3' 端的位置。当检测 RNA 被杂交到 DNA 模板上时,用核酸酶 S1 进行保护试验的分析;
简述核糖核酸酶的作用与用途
核糖核酸酶能催化核糖核酸(RNA)的降解,现已能人工合成。药用油膏局部外用于治疗外伤及关节疼痛。据报道,核糖核酸酶能改变宿主细胞新陈代谢,抑制病毒合成,在体外能抑制流感病毒增殖,在鸡胚内能抑制痘苗、疱疹病毒形成。临床用核糖核酸酶每天肌注180毫克,对治疗流行性脑炎有益。
关于核糖核酸酶H的特征介绍
在许多反转录病毒中与多功能酶的反转录酶有关,在病毒基因组进入DNA转录的不同阶段执行重要的功能。在真细菌中,核糖核酸酶H确信在以下方面是所必需的:从Okazaki片段去除RNA引物时、在转录子进入DNA聚合酶I启动DNA合成所用引物的转录过程时,以及在去除R-环为在大肠杆菌染色体复制起点提供不规
核酸酶保护分析的方法特点和应用
中文名称核酸酶保护分析英文名称nuclease protection assay定 义当核酸(DNA、RNA)中某段序列能与其他核酸(DNA、RNA)形成互补结合或与某种蛋白特异结合后,核酸酶(如S1核酸酶)就只能降解反应系统中未结合的核酸,留下被结合的核酸段落可以定性或定量检测出来的方法。此法可
限制性内切核酸酶的定义
限制性核酸内切酶是可以识别并附着特定的核苷酸序列,并对每条链中特定部位的两个脱氧核糖核苷酸之间的磷酸二酯键进行切割的一类酶,简称限制酶。根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,分别是第一型(Type I)、第二型(Type II)及第三型(Type III)。Ⅰ型限
S1核酸酶的功能和来源
S1核酸酶是从米曲霉(aspergill suoryzae) 中提取的。S1核酸酶是一种特异性单链核苷酸内切酶。能降解单链DNA 和单链RNA,产生5'- 单链核苷酸或寡核苷酸。双链DNA、双链RNA 和DNA-RNA 杂交分子对S1核酸酶具有较大的抵抗力,只有高浓度的酶才可使其消化。它水解
核糖核酸酶A的主要用途介绍
核糖核酸酶A(RNase A)来源于牛胰脏,是一种内切核糖核酸酶,可特异攻击RNA上嘧啶残基的3’端,切割胞嘧啶或尿嘧啶与相邻核苷酸形成的磷酸二酯键,反应终产物是3’嘧啶核苷酸和末端带3’嘧啶核苷酸的寡核苷酸。无辅助因子及二价阳离子存在时,核糖核酸酶A的作用可以被胎盘RNA酶抑制剂(RNasin
S1核酸酶的基本信息介绍
对双链DNA、双链RNA和DNA-RNA杂交体相对不敏感。通常水解单链DNA的速率要比水解双链DNA快75000倍。这种酶需要低水平的Zn2+的激活,最适pH范围为4.0~4.3。一些螯合剂(如EDTA和柠檬酸等)能强烈地抑制S1核酸酶活性,此外磷酸缓冲液和0.6%左右的SDS溶液也可以抑制它的
关于核糖核酸酶的基本信息介绍
核糖核酸酶,去氧核糖核酸酶在高等动物的胰液中发现。核苷酶,发现存在于高等动物的肠液中。 人体的消化功能依靠胃肠运动的机械性消化和消化酶作用的化学性消化来完成。消化液中含有大量消化酶,可促进食物中糖、脂肪、蛋白质的水解。由大分子物质变为小分子物质,以便被人体吸收利用。葡萄糖、甘油、甘油-酯、氨基
牛胰核糖核酸酶的功能结构
核糖核酸酶中有4对-S-S-,从理论上说有105种不同配对方式,但唯有与天然核糖核酸酶完全相同的配对方式,方才有酶活性。这说明:变性了的核糖核酸酶只要其一级结构未破坏,就能回复到原来的三级结构。(注:在生物体内尚有二硫键异构酶,使错配接的-S-S-恢复成正确的结构。)蛋白质的功能决定于构象,三级结构
核糖核酸酶-P的结构和分布情况
核糖核酸酶 P 是一种核糖核蛋白, 含有一个单链RNA分子, 长度为375个碱基, 结合一个相对分子质量为20kDa的多肽(119个氨基酸残基)。RNA具有催化切割tRNA的能力,蛋白质则起间接的作用,可能是维持RNA结构的稳定。该酶广泛存在于原核生物和真核生物(核仁、叶绿体和线粒体)中,也参与核糖
牛胰核糖核酸酶的基本信息
核糖核酸酶中有4对-S-S-,从理论上说有105种不同配对方式,但唯有与天然核糖核酸酶完全相同的配对方式,方才有酶活性。牛胰核糖核酸酶这说明:变性了的核糖核酸酶只要其一级结构未破坏,就能回复到原来的三级结构。(注:在生物体内尚有二硫键异构酶,使错配接的-S-S-恢复成正确的结构。)蛋白质的功能决定于
简述核糖核酸酶的理化性质介绍
核糖核酸酶,白色粉末。为具有球蛋白性状的一种蛋白质。溶于水、50%丙酮。此酶最适宜温度为60℃,85℃以上失去作用,最适宜的pH值为7.6。是催化核糖核酸水解的一种核酸内切酶,可使胞嘧啶核酸解聚。对胸腺核酸则无作用。用于生化研究。
紫外线特异的内切核酸酶的定义
中文名称紫外线特异的内切核酸酶英文名称ultraviolet specific endonuclease定 义能识别由于紫外线照射而引起的DNA损伤位点并切开邻近的磷酸二酯键的酶,断裂后的受损片段的5′端为磷酸基团。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),酶(二级学科)
S1核酸酶作图的方法和原理
三种不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行RNA定量,确定内含子位置,以及用来鉴定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。当检测RNA被杂交到DNA模板上时,用核酸酶S1进行保护试验的分析;当检测RNA被杂交到来自DNA模板的RNA上时用RNA酶。外切核酸酶Ⅶ有更
限制性内切核酸酶的类型介绍
根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,分别是第一型(Type I)、第二型(Type Ⅱ)及第三型(Type Ⅲ)。 第一型限制酶 同时具有修饰(modification)及识别切割(restriction)的作用;另有识别(recognize)DNA上特定碱
关于核糖核酸酶P的研究分析介绍
来自美国科罗拉多州大学分子,细胞和发育生物学系,以及亚利桑那州立大学生命科学学院化学与生物化学系的研究人员通 过比较真核与细菌核糖核酸酶P RNA(Ribonuclease P RNA,RNase P)的不同,获得了一RNase P三级结构,为研究RNase P带来了突破性进展,这一研究成果公布
限制性内切核酸酶的分类性质
根据酶的功能特性、大小及反应时所需的辅助因子,限制性内切酶可分为两大类,即I类酶和Ⅱ酶。最早从大肠杆菌中发现的EcoK、EcoB就属于I类酶。其分子量较大;反应过程中除需Mg2+外,还需要S-腺苷-L甲硫氨酸、ATP;在DNA分子上没有特异性的酶解片断,这是I、Ⅱ类酶之间最明显的差异。因此,I类
乙二醇双2氨基乙醚四乙酸的基本信息
中文名称乙二醇双2-氨基乙醚四乙酸英文名称ethylene glycol bis (2-aminoethyl ether) tetraacetic acid;EGTA定 义与乙二胺四乙酸相似,能与二价金属离子结合的一种螯合剂,但对钙离子有更高亲和性。可专门用做需要钙离子的蛋白酶(如BAL31)的抑
“基因组编辑核酸酶”当选《自然》年度研究方法
《自然—方法学》视频介绍“基因组编辑核酸酶” 《自然》杂志子刊《自然—方法学》在最新一期推出了2011年度研究方法专刊,评选出了本年度研究方法——基因组编辑核酸酶(Gene-editing nucleases)。专刊包括社论、新闻特写、评论、视频等内容;同时,还评出其他8个值得关注的研
脱氧核糖核酸酶的用法及用量
1.吸入或腔内注射:1次可达5万单位。2.肌注:每次100万单位,2日1次。3.局部涂搽浓度为每毫升1250~2500单位。常与链激酶合用。不良反应和注意:注射后可能引起无力、胃肠道反应,还偶有皮疹。