用肽底物检测蛋白质激酶的活性和特异性实验1
利用肽底物分析酪蛋白激酶Ⅰ和Ⅱ试剂、试剂盒酪氨酸激酶分析缓冲液酪蛋白激酶肽底物溶液实验步骤1. 在离心管里配制 50 μl 反应混合物:5X 酪氨酸激酶分析缓冲液 10 μl10 mmol/L 酪蛋白激酶肽底物溶液 5 μl[γ-32P] ATP(终浓度 5 μCi/5 μmol/L ATP) 5 ......阅读全文
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
蛋白激酶的分析是使用标记的供体底物,当酶样品中含有磷酸转移酶活性时,蛋白 质或多肽受体底物中标记物的积累就很容易被检出。实验材料1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反
用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相互作用缓冲液PK 缓冲液还原型谷胱甘肽于 Tris-Cl中洗涤缓冲液 1 洗涤缓冲液 2蛋白酶蛋白激酶 A[y-32P]ATP仪器、耗材 与待筛选蛋白结合的膜或滤膜Sephadex G-50 转柱实验步骤 材
用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
实验材料 结合到谷胱甘肽-球脂糖的 GST 融合蛋白 试剂、试剂盒 碱性缓冲液 封闭缓冲液 相
用-GST-融合蛋白检测蛋白质蛋白质相互作用实验
GST 融合蛋白作为在细菌中表达的重组蛋白,从它们被介绍以来,已用于成千上万个研究项目中(Smith and johnson 1988)。它们常常被用于制备抗体,这些抗体可用于研究蛋白质-蛋白质相互作用以及分析生化反应。本实验来源于分子克隆实验指南(第三版)下册,作者:〔美〕J. 萨姆布鲁克 D.W
肠血管活性肽的概述
血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)由28个氨基酸组成,主要是由肠道神经元释放,在中枢神经系统中也大量存在,为重要的脑肠肽。胰腺中也有很多VIP能神经纤维。脂肪餐和迷走神经刺激均可引起VIP的释放。另外,肠缺血也可刺激其释放。它有着广泛的生物活性,如
血管活性肽的功能组成
中文名称血管活性肽英文名称vasoactive peptide定 义对血管有活性作用的肽类的泛称。包括血管活性肠收缩肽和血管活性肠肽等。应用学科生物化学与分子生物学(一级学科),激素与维生素(二级学科)
活性肽的提取方法介绍
肽类的提取方法主要有两种,一种是化学法提取,一种是物理法提取。二者各有利弊,“化学提取法”主要是“化学酶反应提取法”。其反应快,生产量大,但缺点是提取出来的肽类活性较低,该法是市面上肽类产品的主要来源;“物理提取法”主要指“介质电容法活性肽提取技术”,其特点是反应慢,生产量小,但是生产出来的肽类
人体活性肽的相关介绍
活性肽(Active Peptide)又称生物活性肽或生物活性多肽,是一千多种肽的总称(如大豆肽、深海鱼皮肽、海参肽等是活性肽中的一种)。 肽是两个或两个以上的氨基酸以肽键相连的化合物,具有活性的多肽称为活性肽,其在人体内起重要生理作用。 它在人的生长发育,新陈代谢,疾病以及衰老,死亡的过程
血管活性肠肽的作用?
血管活性肠肽其实是一种神经递质。它存在于中枢神经系统和肠神经系统中。血管活性肠肽的在生物学方面的主要功能是扩张心、脑、肝血管,降低血压,降低肺动脉压,调节脑血流量,调节体温和泌乳素释放等等。血管活性肠肽可以有效松弛肠平滑肌、肛门括约肌、食管下括约肌。因此,血管活性肠肽的变化与胃肠道疾病密切相关。
活性肽的生理功能
目前,它成为全世界研究的热点、大量的国内外研究结果表明:生物活性肽是涉及生物体内多种细胞功能的生物活性物质,在生物体内已发现几百种,不同的生物肽具有不同的结构和生理功能,如抗病毒、抗癌、抗血栓、抗高血压、免疫调节、激素调节、抑菌、降胆固醇等作用。 活性肽的的生理功能如下: 1.调节体内的水分
简述活性肽的主要应用
目前对肽类物质的应用主要在以下三个方面: 1.功能性食品:具有一定功能的肽类食品,目前是国际上研究的热点。日本、美国、欧洲已捷足先登,推出具有各种各样功能的食品和食品添加剂,形成了一个具有极大商业前景的产业。 2.肽类试剂:纯度非常高,主要应用在科学试验和生化检测上,价格十分昂贵。 3.肽
消化道脂肪酶底物特异性
Ewa RogalskaS等(1990)研究了猪胰脂肪脂肪酶、兔胃脂肪酶和人胃脂肪酶对化学结构类似、但在同一甘油三酯分子中立体结构不同的酯键的立体选择性,结果表明两种胃脂肪酶对sn-3位具有立体选择性。如果由对映体过量百分率表示的话,人和兔胃脂肪酶对三辛酸甘油酯和三油精分别是54%、70%和74%、
利用植物蛋白质芯片研究蛋白磷酸化实验
实验材料异丙基 β-D-硫代半乳糖苷试剂、试剂盒非变性裂解液非变性洗涤液非变性洗脱液苯甲基磺酰氟仪器、耗材超声匀浆器聚丙烯柱实验步骤3.1 非变性条件下重组激酶的纯化用于磷酸化筛选的激酶必须是可溶和有活性的,且无其他激酶参杂的纯化激酶。因此,我们可以从 cDNA 表达文库中,大量生产和纯化组氨酸标记
生物发光技术在生命科学中的应用(二)
为了进一步提高检测基因的效率,我们对萤光素酶基因序列的密码子进行了优化,使得它在多种哺乳细胞中的表达水平提高了5~10倍;同时,为了减少对基因的非特异性调控,我们也对萤光素酶的载体进行了优化,去除了载体上哺乳动物转录因子结合序列的保守序列,从而大大降低了实验的本底,显着提高了实验的相对信号强度。优化
血管活性肠肽简介
血管活性肠肽(VIP),又名舒血管肠肽,是神经递质的一种,存在于中枢神经和肠神经系统中。VIP由28个氨基酸组成,主要是由肠道神经元释放。VIP在生物体内具有双重作用,既是胃肠道激素,又是神经肽。VIP功能多样,如扩张心、脑、肝血管,调节脑血流量,降低肺动脉压,降低血压,松弛支气管平滑肌,调节中
分离肽和蛋白质色谱柱的维护
1、使用常规要求pH:为了保证色谱柱长寿命,硅胶基质色谱柱的使用pH范围是2~7,超出此范围的色谱柱寿命与功能团结构有关,但是偏离2~7范围越远,色谱柱性能下降的越快。温度:典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命。缓冲溶液:生物样品分离通常要求使用缓冲溶液控制流动相的p
分离肽和蛋白质色谱柱的维护
1、使用常规要求 pH:为了保证色谱柱长寿命,硅胶基质色谱柱的使用pH范围是2~7,超出此范围的色谱柱寿命与功能团结构有关,但是偏离2~7范围越远,色谱柱性能下降的越快。 温度:典型硅胶基质色谱柱的使用温度在5℃与60℃之间,高温使用会缩短柱寿命。 缓冲溶液:生物样品分离通常要求使用缓冲溶液控制流动
细胞活性和细胞毒性检测的实验方法
细胞数量确定1.将细胞悬浮液(100μL/孔)接种在96洞孔板中。将板在潮湿的培养箱中预孵育(例如,在37℃,5%CO2下)。2.向板的每个孔中加入10μLCCK8溶液。注意不要在孔洞中引入气泡,因为它们会干扰O.D.读数。3.将培养板在培养箱中孵育1-4小时。4.使用酶标仪测量450 nm处的吸光
微量热技术(Microcalorimetry)
微量热法(包括等温滴定量热和差示扫描量热)是近年来发展起来的一种研究生物热力学与生物动力学的重要结构生物学方法,它通过高灵敏度、高自动化的微量量热仪连续和准确地监测和记录一个变化过程的量热曲线,原位(in situ)、在线(on-line)和无损伤地同时提供热力学和动力学信息。 微量热法具有以下特点
大连化物所等磷酸化蛋白质组分析方法研究取得新进展
近日,中国科学院大连化学物理研究所生物分离分析新材料与新技术研究组(1809组)邹汉法、叶明亮等在磷酸化蛋白质组分析新方法研究方面取得新进展。该团队与加拿大西安大略大学教授李顺成研究团队利用生物分子之间的特异性识别作用建立了一种非抗体的酪氨酸磷酸化肽段富集新方法,显著提高了酪氨酸磷酸化蛋白质组的
大化所磷酸化蛋白质组分析方法研究取得新进展
近日,我所生物分离分析新材料与新技术研究组(1809组)邹汉法、叶明亮等在磷酸化蛋白质组分析新方法研究方面取得新进展。该团队与加拿大西安大略大学李顺成教授研究团队利用生物分子之间的特异性识别作用建立了一种非抗体的酪氨酸磷酸化肽段富集新方法,显著提高了酪氨酸磷酸化蛋白质组的分析覆盖率和灵敏度,相关
大连化物所等对磷酸化蛋白质组分析方法研究
近日,中国科学院大连化学物理研究所生物分离分析新材料与新技术研究组(1809组)邹汉法、叶明亮等在磷酸化蛋白质组分析新方法研究方面取得新进展。该团队与加拿大西安大略大学教授李顺成研究团队利用生物分子之间的特异性识别作用建立了一种非抗体的酪氨酸磷酸化肽段富集新方法,显著提高了酪氨酸磷酸化蛋白质组的分析
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
基本方案 实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)
Ca2+/钙调蛋白依赖性激酶分析实验
实验方法原理 实验材料 1 mg ml 钙调蛋白(- 70℃ 小量储存)有 CaM 激酶活性的酶样品10 mmol L 合成肽底物溶液试剂、试剂盒 [γ-32P] ATP 溶液5 × CaM 激酶反应缓冲液仪器、耗材 30℃ 水浴实验步骤 1. 对 1.5 ml 微量离心管做双管标记,每个反应按以下
酪蛋白激酶分析实验_用-β酪蛋白
实验材料β-酪蛋白(溶于水)有酪蛋白激酶活性的酶样品试剂、试剂盒[γ-32P] ATP 溶液酪蛋白激酶反应缓冲液TCASDS-PAGE 样品缓冲液仪器、耗材30℃ 水浴P81 磷酸纤维素膜离心管离心机实验步骤1. 每个鉴定反应按以下比例将各反应组分加入 1.5 ml 微量离心管中:4 μl 5 ×
饲料蛋白酶的最新研究与应用进展
蛋白质、碳水化合物和脂肪是三种主要的常量营养元素,可提供动物生长所需的能量和必需营养物质。以蛋白质为例,必需的营养元素是氨基酸,它也是机体和所有生物代谢过程中必需的。动物可产生内源蛋白酶来消化蛋白质,例如胃蛋白酶、胰蛋白酶和糜蛋白酶是最主要的内源蛋白酶。一般来说,内源蛋白酶对饲料蛋白的消化效率为
简述注射用胸腺肽α1的基本信息
注射用胸腺肽α1在900ug/m2剂量下,胸腺肽α1皮下注射约1hr后血浓度峰值是25~30ug/ml。峰水平持续6hr而在随后18hr内回复到基础水平。连续每周两次注射15周后,胸腺肽α1的血浆基础值作很轻微地增加。 一、注射用胸腺肽α1的用法用量: 皮下或肌肉注射:1次10-20mg,一
简述注射用胸腺肽α1的功能主治
注射用胸腺肽α1用于治疗各种原发性或继发性T细胞缺陷病,某些自身免疫性疾病,各种细胞免疫功能低下的疾病及肿瘤的辅助治疗。包括: 1.各型重症肝炎、慢性活动性肝炎、慢性迁延性肝炎及肝硬化等; 2.带状疱疹、生殖器疱疹、尖锐湿疣等; 3.支气管炎、支气管哮喘、肺结核预防上呼吸道感染等; 4.
活性肽的相关试剂的介绍
这类肽包括谷胱甘肽、肠促胰酶肽等。谷胱甘肽在小肠内可以被完全吸收,它能维持红细胞膜的完整性,对于需要巯基的酶有保护和恢复活性的功能,它是多种酶的辅酶或辅基,可以参与氨基酸的吸收及转运,参与高铁血红蛋白的还原作用及促进铁的吸收。 谷胱甘肽(GSH)是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸通过肽键缩合而成的三
用肽适配体正向分析细胞过程实验
实验方法原理 实验材料 用于遗传学筛选的酵母株肽适配体库试剂、试剂盒 完全极限(CM) 缺失成分液体培养基和平板仪器、耗材 30℃ 培养箱实验步骤 1. 用高效乙酸锂转化法将 50~100 ug 肽适配体库(在 pJM-2 或 pJM-3 中)转化酵母筛选株(106~107 转化株)。将转化株涂布到