引物合成及各种问题总结（2）
1.如何测定引物的OD值？ 用紫外分光光度计在260nm波长测定溶液的吸光度来定量，请注意紫外分光光度计的使用，测定时溶液的吸光度最好稀释到0.2-0.8之间(吸光度太高或太低会有较大的误差)。DNA干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，取部分溶液稀释到1ml并在1ml标准比色皿中测定其吸光度，即为所测体积的OD值，进而可以计算出母液的OD值。 举例：您拿到一管干粉的DNA，用1ml水溶解成母液，取该母液50μL稀释成1ml并在1ml标准比色杯中测定的吸光度为0.25，说明该50μL中含有0.25OD的DNA，也即说明原来1ml母液中含有5OD的DNA。 2.怎样溶解引物？ 我们的的合成报告单给出了每OD引物稀释为100μmoL/L（即100pmol/ul）浓度的加水量，您可以根椐您的实验需要加入适量的无核酸酶的双蒸水（PH>6.0）或TE缓冲液（PH 7.5-8.0），开启瓶盖溶解之......阅读全文
余氯各种常见问题与常识！
传统的余氯测试方法主要有分光光度法和比色法，这二种方法的缺点是：需要5种以上的试剂和溶液，测试精度受样品的颜色和浑浊度的影响。为何说电极法测试余氯是最简单的测试方法？传统的余氯测试方法主要有分光光度法和比色法，这二种方法的缺点是：需要5种以上的试剂和溶液，测试精度受样品的颜色和浑浊度的影响。而且，这
cDNA合成技术2
3. 第一链产量测定第一链掺入率(%)= 掺入cpm/总cpm ×100%掺入dNTP(nmol)=2nmol dNTP/μl ×反应体积(μl)×(第一链掺入率)设330为每mol dNTP的平均分子量合成cDNA量(ng)=掺入dNTP (nmol)×330ng/nmolmRNA向cDNA转变率
BioTNT－mRNA－引物筛选，引物定制或specific－primers的使用说明2
1、 低速离心数秒，并且按照荧光PCR仪的使用说明放置好您的PCR管/条/板；2、 从下列表中选择最合适的实验反应条件，按照荧光PCR仪的使用说明设置好PCR反应条件： 荧光PCR仪 循 环 时 间
颗粒计数器使用问题总结
仪器在测量设备的过程中总会遇到这样那样的问题，颗粒计数器使用也会遇见多种问题，常见的问题总结如下： 1、方法误差 是指由于使用的测量方法不完善，理论依据不严密，对某些经典测量方法做了不适当的修改简化所产生的误差，即凡是在测量结果的表达式中没有得到反映的因素，而实际上这些因素又起作用时所引
紫外线灭菌相关问题总结
1.紫外线灭菌是用紫外线管照射进行的。波长在220-300纳米的紫外线称为"杀生命区"，其中以260钠米的杀菌力最强。紫外线作用于细胞DNA，使DNA链上相邻的嘧啶碱形成嘧啶二聚体（如胸腺嘧啶二聚体），抑制了DNA复制。另外，空气在紫外线照射下可以产生臭氧，臭氧也有一定的杀菌作用。紫外线透过物质的能
紫外线灭菌相关问题总结
1.紫外线灭菌是用紫外线管照射进行的。波长在220-300纳米的紫外线称为"杀生命区"，其中以260钠米的杀菌力最强。紫外线作用于细胞DNA，使DNA 链上相邻的嘧啶碱形成嘧啶二聚体（如胸腺嘧啶二聚体），抑制了DNA复制。另外，空气在紫外线照射下可以产生臭氧，臭氧也有一定的杀菌作用。紫外线透
关于PCR假阴性问题总结
PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性
免疫荧光常见问题总结
1、问：免疫荧光：用免疫荧光方法做同样的内容，组织切片和培养细胞，两者操作过程中有哪些不同？参考见解：只是固定方法不同，细胞固定用甲醇，切片固定用多聚甲醛，而染色方法是一样的。2、问：近期要做免疫荧光双标，不知哪位有免疫荧光双标技术的详细步骤以及注意事项？参考见解：我正在做冰冻组织切片的免疫荧光的双
蛋白纯化常见问题总结（二）
3)Sephadex G-25(medium)柱脱盐时，盐浓度太高对柱效有影响吗?若有，一般对盐浓度限度如何?大家别客气，除盐对于浓度应该也是有一定的限制的，同样的样品盐浓度高的自然要比浓度低的要在柱子上走的峰要宽些，相对需要的柱子的分辨率也要高点，但是在正常的范围如1-2M应该影响不大，不过要除得
蛋白纯化常见问题总结（一）
蛋白纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我用助
PCR扩增失败是引物的问题吗？
基本不是。当今发展出各色各样的PCR扩增技术，各色各样的高温聚合酶，就是来解决PCR扩增中遇到的扩不出，扩增效率低的问题。如槽式PCR就是扩增那些拷贝数很低的基因片段。有些重复片段的扩增, GC含量高的片段，非要采用特殊扩增手段才能扩增出了。
解决荧光定量PCR引物探针问题
荧光实时定量 PCR 技术 (real-time quantitative PCR，qPCR) 几乎是现代分子生物学技术中最重要、应用最广泛的核酸定量检测技术。成功的定量 PCR 实验离不开精准的实验设计和操作流程。 实时荧光定量 PCR 分析的部分实施需要经过优化以确保所有反应参数均设置精确
western－blot失败经验总结2
我就跑胶和转膜谈一点儿自己的体会1、跑胶 电泳Buffer重复利用的时候要注意，不能混浊，有时候能用个3－4次，有时候第二次都不行了，事先前预电泳一下，看看气泡的均匀度；Buffer一定要淹过梳子孔，否则就会发现今天的蛋白不会跑；跑的时候先用低电压跑过浓缩胶，再换高电压跑分离胶，不要追求速度，慢慢跑
Transwell侵袭实验总结－（2）－实验用品
我的课题涉及Transwell侵袭实验和Transwell迁移实验，其他方面的Transwell应用我不太清楚，因此这里主要谈谈Transwell侵袭实验。1．实验用品：① Transwell小室：多种厂家可提供，论坛里常用的是Costar、Corning、BD生产的小室，我们实验室用的是Chemi
气相色谱各种出峰异常问题原因及解决办法
色谱的分析过程比较复杂，诸多因素都可对结果产生影响，经常会出现预料不到的现象，出峰异常就是经常遇到的问题之一，一般表现为色谱出鬼峰，色谱峰分不开，色谱峰拖尾，色谱峰出现圆顶峰，进样后不出峰等，这些问题的出现看似无规律，认真分析大部分有迹可循。气相色谱分析测试常见问题及解决一．标定时有峰丢失可能的原因
刚合成的引物用降落PCR的原因分析
因为理论计算的TM值用来确定退火的温度只是一个参考呀,最合适的退火温度会因为各种原因而有所差异,就连PCR仪都会有影响的,我们实验室就是,好多都是在一台能拉出条带,而在另一台上就拉不出条带,或者相反的。降落(TD)PCR代表了一种完全不同的PCR优化方法。由于开始时的退火温度选择高于估计的Tm值,随
随机引物合成法双链DNA探针标记法
随机引物合成双链探针是使寡核苷酸引物与DNA模板结合,在Klenow酶的作用下,合成DNA探针。合成产物的大小、产量、比活性依赖于反应中模板、引物、dNTP和酶的量。通常,产物平均长度为400-600个核苷酸。利用随机引物进行反应的优点是：(1)Klenow片段没有5'→3'外切酶活
合成的引物5’端是否有磷酸化？
合成的引物5’为羟基，没有磷酸基团。如果需要您可以用多核苷酸激酶进行5’端磷酸化，或者要求我们合成时直接在5’或3’端进行磷酸化，需要另外收费。
pcr扩出目的片段及引物二聚体，哪出了问题
只要目的片段位置正确 无需去管引物及其二聚体的，结果可靠。究竟是不是引物二聚体 你从理论上就可以分析判断。一般常见情况是引物加过量了，在溴酚蓝位置常见亮带，在这中情况下，你不需要理他，若需要漂亮图片（发论文），2办法：可以减少引物加入量，同时稍微降低镁离子浓度；或者在保证底物不缺乏情况下，增加几个循
ELISA中常见问题及解决方法经验总结
【摘要】：ELISA 试验以灵敏度较高、特异性较好的特点在临床上得到了广泛的应用，但操作中的各个环节对试验的检测效果影响较大，如不注意，有可能导致显色不全、花板等结果。我将操作中各个环节常出现问题的原因及解决办法总结于下，以期给同行带来一些启发，提高试验质量。相关专题 ELISA免疫实验技术 e
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或
PCR引物设计及评价
【实验目的】1、掌握引物设计的基本要求，并熟悉使用Primer premier5.0软件进行引物搜索。2、掌握使用软件oligo6.0对设计的引物进行评价分析。【实验原理】一、引物设计原则聚合梅链式反应（polymerase chain reaction）即PCR技术，是一种在体外快速扩增特定基因或
各种生化分析检验系统介绍(2)
真正的POCT IRMA TRUpoint可以现场即时进行pH、血气、血球容积、电解液和其它生化检测,迅速、可靠地提供检测结果。该机采用带有交互式触摸屏的电化学传感技术,可快速指导用户进入检测程序。所用耗材为室温保存并具自我校准功能的一次性耗材，平均60到90秒可报出检测结果。该机轻便易携带，内
嘧啶和各种取代的嘧啶的合成方法
嘧啶和各种取代的嘧啶有多种方法合成。例如，巴比妥酸(2，4，6-三羟基嘧啶)可由脲与丙二酸二乙酯在醇钠的作用下缩合而成。巴比妥酸与磷酰氯一起加热，得2，4，6-三氯嘧啶，它与甲醇钠反应，又可得三甲氧基嘧啶。氯代嘧啶与氨或一级、二级胺反应，生成相应的氨基嘧啶。嘧啶的衍生物胞嘧啶、尿嘧啶和胸腺嘧啶，是核
总结几个液相色谱柱的问题
色谱柱是液相色谱仪的核心，在我们使用液相色谱仪的时候，保证液相色谱柱的柱效，延长色谱柱的使用寿命是很重要的事情，当我们使用的时候色谱柱如果出息压力过高或者过低等问题都是属于柱压问题。液相色谱柱如果压力过高是因为柱子里面产生了杂质，造成液体的流动力加大而所造成。下面为大家总结的几个液相色谱柱的问题
高速离心机－PCR问题的总结
pcr产物的电泳检测时间一般为48h以内，有些zui好于当日电泳检测，大于48h后带型不规则甚致消失。假阴性，不出现扩增条带 pcr反应的关键环节有①模板核酸的制备，②引物的质量与特异性，③酶的质量及活性 ④pcr循环条件。寻找原因亦应针对上述环节进行分析研究。 模板：①模板中含有杂蛋白质
蛋白质纯化常见问题总结
蛋白质纯化过程中常遇见一些问题，这里整理了以下几个蛋白质纯化实验中遇见的问题及其解决方案。1)我现在手头有个融合蛋白，纯化的时候用助溶剂溶解后做了GST亲和层析，之后用蛋白酶切割后却发现目的蛋白没有活性。请问有哪些可能会出现这种原因?怎么解决?测过基因序列，没有问题。细胞破碎后，融合蛋白在沉淀里，我
RTPCR实验方法总结(2)
寡聚(dT)纤维素柱纯化mRNA一、试剂准备1．3M醋酸钠（pH 5.2）2．0.1M NaOH3．1×上样缓冲液：20mM Tris-HCl(pH 7.6)；0.5M NaCl；1M EDTA（pH 8.0）；0.1%SLS(十二烷基氨酸钠。配制时可先配制Tris-HCl(pH 7.6)、NaCl
包涵体的纯化和复性总结2
8、包涵体复性液配方 对于包涵体复性，一般在尿素浓度4M左右时复性过程开始，到2M 左右时结束。对于盐酸胍而言，可以从4M开始，到1.5M 时复性过程已经结束。TRIS系统和PBS系统都没有明确的规定，这些需要你在实验过程中不断试验，确定合适的缓冲系统；不过复性过程主要是注意以下几个问题： 1）最适
固相多肽合成的特点及主要问题分析
固相合成法对于多肽合成的显著的优点：简化并加速了多步骤的合成；因反应在一简单反应器皿中便可进行，可避免因手工操作和物料重复转移而产生的损失；固相载体共价相联的肽链处于适宜的物理状态，可通过快速的抽滤、洗涤未完成中间的纯化，避免了液相肽合成中冗长的重结晶或分柱步骤，可避免中间体分离纯化时大量的损失；使