WesternBlottingProtocols
back to topProtocolStandard vs. Rapid Immunodetection ProceduresThere are two types of protocols for immunodetection: Standard and rapid.Standard vs. Rapid ImmunodetectionStepStandard ImmunodetectionRapid ImmunodetectionBlock the membrane1 hrNoneIncubate with primary antibody1 hr1 hrWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minIncubate with second antibody1 hr30 minWash the membrane3 x 10 min3 x 5 minAdd substrate5 min5 minTo......阅读全文
Western－blotting之样品制备注意事项
无论你是处理细胞还是组织样本，蛋白提取都是一个很艰难的过程。要么使用物理方法将细胞破碎或者使用化学试剂处理细胞进行裂解。如果第一步提取就搞砸的话，那么长时间小心翼翼培养的细胞就会完全浪费。这里有一些建议可以帮助你进行样品的抽提。 头号公敌：蛋白酶 无论您选择哪种提取方法，蛋白酶都将是
Azure－biosystems－定量Western－Blotting荧光检测优势介绍
定量Western Blotting荧光检测的优势精确的western blot蛋白定量，要求在宽泛的范围内信号与蛋白浓度呈现线性变化。对于化学发光检测方法，虽然灵敏度极高，但由于其原理是酶促反应，信号随时间变化，重复性差。荧光检测是定量western blot的“金标准”。信号强度与结合在靶标蛋白
Western－Blotting常见问题及解决方案
Western Blotting常见问题及解决方案问题原因解决方案胶不平玻璃板不干净胶板洗刷干净；催化剂或加速剂的量不合适加入过硫酸铵和TEMED的量要合适；试剂未混均，致使部分胶块聚合不均匀加入试剂后摇匀，使其充分混合；受热不均匀导致胶聚合不均匀温度合适凝胶漏液玻璃板未对齐两块玻璃板底部要对齐条带
Western－blotting之样品制备注意事项
无论你是处理细胞还是组织样本，蛋白提取都是一个很艰难的过程。要么使用物理方法将细胞破碎或者使用化学试剂处理细胞进行裂解。如果第一步提取就搞砸的话，那么长时间小心翼翼培养的细胞就会完全浪费。这里有一些建议可以帮助你进行样品的抽提。头号公敌：蛋白酶无论您选择哪种提取方法，蛋白酶都将是一个主要的关注点。当
免疫印迹（Western－Blotting）实验的样品制备介绍
对于Western Blotting实验而言,样品处理是关键步骤之一,获得的蛋白样品必须均质、可溶,并解离成单个多肽亚基,且尽量减少相互间的聚集,使其最终仅依赖本身的分子量大小进行分离。当目标蛋白的含量很低时,需要选取目标蛋白含量较高的组织或细胞器(如核抽提物),或者通过免疫沉淀等方式进行富集。通常
今日让你刮目相看的Western－blotting成像系统
为了追踪Western blot中产生的信息，研究人员大多需要使用成像系统。这些工具将蛋白分析的图像转换成数字文件。近年来，Western blotting成像系统有了明显改进。在成像工具的帮助下，数据可以更好地定量。 与此同时，Western blot的操作也在不断变化。研究人员正逐渐从暗室
蛋白质印记技术(Westernblotting－technique)
一、 概 述 原理 Western-blotting印记是将蛋白质经分离后从凝胶转移到固相支持物上，然后用特异性的抗体进行检测。 二、 材料和方法 (一) 材料 1． 质粒 pW425t+SO7 2. 宿主菌菌株 E.coli X51，-86℃保存 3. 培养基 LB基本
免疫印迹（Western－blotting）实验原理、试剂和操作步骤
(一)原理Western blot是一种在PVDF或硝酸纤维素（NC）膜上进行的抗原抗体反应。蛋白电泳后，将蛋白转移至膜上，再与特异性抗体孵育，洗去游离的抗体，然后和酶标记的二抗孵育，再进行底物显色。由于抗原抗体反应特异性好，亲合力高，Western blot检测的灵敏度较高，尤其是采用
Western－blotting蛋白印迹市场概况和主要品牌及产品
近日，MarketsandMarkets咨询公司发布了全球western blotting市场的分析报告。据MarketsandMarkets预测，全球western blotting的市场规模将从2016年的5.75亿美元增长到2021年的7.31亿美元，复合年均增长率达4.9%。另一家Futur
免疫组化技术与Western－blotting、ELISA的异同
1）Western blotting 蛋白质免疫印迹，也是利用抗体抗原反应原理，结合化学发光等技术来检查组织或细胞样品内蛋白含量的检测方法。与免疫组化技术相比，定量可能更加准确；当然Western blotting也可定性和定位（通过提取膜蛋白或核蛋白、胞浆蛋白分别检测其中抗原含量，进而间接反
Western－blotting（蛋白质印迹）方法原理和优化
抽滤抽滤是一种直接将蛋白质转移到膜上的方法。利用真空使溶解的样品滤过膜，蛋白质吸附到膜上，同时样品中其它成分被真空抽走。另外，也可直接将样品点在膜表面使之干燥。随后可对固定在膜上的蛋白质进行分析。点印记和狭缝印记是抽滤方法的两种变型，用多支管装置将样品加到膜上成点状或狭缝图样。这些方法可用于快速定性
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求
在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述，其中指出Western blotting已经有40多年的历史，仍然是现在单一蛋白常用的分析技术，但因为其数据
Chemical－Induction－of－Apoptosis
Chemical Induction of Apoptosis - 1 May 2001p53, p21WAF1, Myc, Bcl-2, Bax, Bcl-x and bak are among the proteins involved in the regulation of apoptosi
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（三）
在《J Proteomics》期刊杂志中2020年2月刊发了《40 years Western blotting: A scientific birthday toast》的文章综述，其中指出Western blotting已经有40多年的历史，仍然是现在单一蛋白常用的分析技术，但因为其数据重复
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（三）
上一期我们聊了期刊杂志的新要求，总结如下： ▶ 不建议跑平行胶，因为平行胶和剥离膜，孵育体系，操作条件的不一致，影响定量的准确性，因此最好内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。▶ 选择宽动态范围的方法，确认信号强度与所上样量之间的线性关系，例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄，不建议使用。▶
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（一）
Western Blotting技术已经问世四十多年了，依然是蛋白分析中最常用和主流的方法。但近些年Western Blotting数据重现性，稳定性，定量准确性等问题，也使这项技术被推到了风口浪尖，同时也有很多文章因为Western Blotting数据的问题而撤稿，而为了尽可能提高Wes
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（二）
4.提交原始数据，例如：JBC，PLOS和CELL等杂志都要求要提供原始数据 聊完了期刊杂志的一些要求，那Azure Sapphire双模式多光谱激光成像系统是如何帮助您获得满足期刊杂志Western Blotting要求的数据： ★ Sapphire是多荧光检测系统，可多达4个激光光源，同时进
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（二）
▶ 不建议跑平行胶，因为平行胶和剥离膜，孵育体系，操作条件的不一致，影响定量的准确性，因此最好内参和目的蛋白要在同一张印迹膜上。 ▶ 选择宽动态范围的方法，确认信号强度与所上样量之间的线性关系，例如用胶片做化学发光方法的动态范围就很窄，不建议使用。 ▶ 强烈推荐使用总蛋白进行归一化，
新时代下对于Western－Blotting发表文章的新要求（一）
Western Blotting技术已经问世四十多年了，依然是蛋白分析中最常用和主流的方法。但近些年Western Blotting数据重现性，稳定性，定量准确性等问题，也使这项技术被推到了风口浪尖，同时也有很多文章因为Western Blotting数据的问题而撤稿，而为了尽可能提高Weste
LCM－PROTOCOLS
Slide SectioningParaffin blocks- For DNA analysis:Special LCM processing schedule is followed.The water bath is cleaned using RNAse Zap™, rinsed thoro
Neutralizing－Bioassay－Protocols
Neutralizing Bioassay ProtocolsIntroductionAntibodies that block binding of cytokines to their specific receptors and neutralize their effects are cri
Streptomyces:Protocols/Conjugation
Intergeneric Conjugation and OverlayDescription Transfer of plasmid/cosmid DNA from a host strain, e.g. E.coli ET12567 [pUZ8002], to the recipient str
General－Cloning－Protocols
Large Scale Preps: (See Large scale plsasmid prep protocol for more details)Cultures: Inoculate a 5 mL LB/Amp (50 - 100 µg/mL) culture in early a.m. w
CGH－Protocols－（四）
CGH Image acquisitionImages were acquired through a Zeiss Axiophot fluorescence microscope using a Plan NEOFLUAR oil objective x63, N.A. 1.25 (Zeiss,
Streptomyces:Protocols/PCR
Description Polymerase Chain Reaction (PCR) is a method of amplifying a specific DNA target sequence. The cycle involves denaturing the template doubl
CGH－Protocols－（一）
Metaphase chromosome preparationMaterials: RPMI 1640 medium fetal calf serum (FCS), 20% Colcemid (e.g. Boehringer Mannheim cell biology reagents, Best
CGH－Protocols－（三）
Hybridizationreagents: labeled tumor and normal-DNA (see protocol Nick translation) salmon sperm DNA, 10 mg/ml (e.g. Promega) human Cot1 DNA, 1 mg/ml
DAPI－Counterstaining－Protocols
实验概要The blue-fluorescent DAPI nucleic acid stain preferentially stains dsDNA; it appears to associate with AT clusters in the minor groove. Binding
CGH－Protocols－（二）
DNA preparation by cryotom tissue dissectionPreparations/Materials: Cool cryostat down to -20 to -30°C about 3 hours prior to dissection Label eppendo